冬虫夏草蛋白提取物抗A549肺癌细胞及免疫活性分析

目的:观察冬虫夏草蛋白提取物（OSPE）对肺癌细胞A549的抑制作用,研究其对免疫功能的影响。方法:以OSPE低、中、高质量浓度(100,200,500 mg·L-1)处理A549细胞24 h;以200 mg·L-1OSPE分别处理A549细胞12,24,48,72 h噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应（Realtime PCR）检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达。利用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒,检测不同质量浓度OSPE对巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1(IL-1),白细胞介素-12(IL-12)的影响。结果:OSPE具有明显抑制A549细胞活力的作用,OSPE(100,200,500 mg·L-1)组抑制率分别为19.29%,58.70%,94.91%;200 mg·L-1OSPE处理A549细胞（12～72 h）,抑制率呈时间依赖性;Hoechst染色后,细胞呈现典型的凋亡形态变化,流式细胞检测凋亡率显示,200 mg·L-1OSPE呈现时间依赖性地增加A549细胞凋亡率（P<0.01）;Real-time PCR结果显示OSPE明显上调Bax mRNA表达量,Bcl-2/Bax显著减小（P<0.01）。ELISA检测结果显示,OSPE对正常巨噬细胞TNF-α,IL-1,IL-12具有显著促进分泌作用（P<0.01）。结论:OSPE可通过上调Bax诱导凋亡,抑制A549细胞增殖;也可促进正常巨噬细胞分泌因子TNF-α,IL-1,IL-12的分泌,推测OSPE可通过诱导凋亡和激活免疫2种方式抑制肿瘤。