多重荧光RT-PCR同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒方法的建立

被引：16

作者：

纪蕾

韩建康

吴晓芳

徐德顺

邱妤怡

陈莉萍

沈月华

查赟峰

机构：

[1] 湖州市疾病预防控制中心

来源：

中国人兽共患病学报 | 2011年 / 27卷 / 04期

关键词：

诺如病毒; 多重荧光RT-PCR; 检测; GⅠ型; GⅡ型;

D O I：

暂无

中图分类号：

R450 [];

学科分类号：

100215 ;

摘要：

目的建立可同时检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的双重荧光RT-PCR快速检测方法,并应用于临床标本的检测。方法使用针对GI型和GⅡ型诺如病毒各亚型代表株保守序列设计的特异性引物和TaqMan探针,通过调整引物、探针浓度优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系。对该方法的灵敏度、特异性、稳定性进行评估,并对临床粪便标本进行检测,与已有的单重荧光RT-PCR方法进行比较。结果实验结果表明,该检测方法特异性强,对GⅠ型、GⅡ型诺如病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、甲型肝炎病毒进行检测,均无交叉反应;对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒核酸的最低检出限分别可达1pg/mL和10pg/mL,并且重复性好;对101份临床标本分别用已有的单重荧光RT-PCR和本文建立的多重荧光RT-PCR进行检测,结果显示本文建立的多重荧光RT-PCR方法对GⅠ型诺如病毒的检测能力优于前者。结论本研究建立的多重荧光RT-PCR方法能同时对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒进行快速检测,并且灵敏度高,特异性好,可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速检测。

引用

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