Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞活化的关系研究

目的探讨Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞（HSC）活化的关系。方法清洁级SD雄性大鼠20只,均分为模型组和对照组。模型组采用腹腔注射四氯化碳（CCl4）和高脂饮食诱导肝纤维化,对照组予以正常饮食。第8周末取模型组存活大鼠与对照组中大鼠各5只处死,取左叶肝脏组织。HE、Masson染色观察两组肝组织病理变化;逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）检测纤维化大鼠肝脏中表达Hedgehog通路成员超音速Hedgehog信号通路（Shh）、膜受体patched（Ptc）、smoothened（Smo）和核转录因子Gli表达;实时荧光定量PCR法检测Hedgehog通路成员及HSC活化标志基因α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA在两组大鼠肝脏中的表达差异。体外培养HSC-T6细胞,RT-PCR检测HSC-T6细胞株中Hedgehog通路成员的表达;四甲基偶氮唑盐比色分析（MTT）法检测不同浓度环耙明（Cyclopamine,Cyc）对HSC-T6增殖的影响;分别用0、100 μmol/L的Cyc干预HSC-T6,实时荧光定量PCR法检测Shh、Smo、Ptc、Gli-1及α-SMA mRNA表达差异。结果模型组大鼠肝脏有大量脂质及胶原沉积,且肝脏组织中均有Shh、Smo、Ptc、Gli-1表达。荧光定量PCR结果示模型组大鼠Shh、Smo、Gli-1及α-SMA mRNA表达均较对照大鼠升高（20.45±3.31、12.78±0.53、10.88±2.41、4.91±2.59比1;P值均<0.05）。Cyc在体外对HSC-T6有明显的抑制作用,且抑制作用呈剂量依赖性（F=636.81,P<0.01）。荧光定量PCR结果示,用Cyc 100 μmol/L干预的HSC-T6中,Ptc、Smo、Gli-1和α-SMA表达量分别为0.20±-0.11、0.21±0.08、0.28±0.05和0.27±0.10,与Cyc 0 μmol/L干预比较差异均有统计学意义（P值均<0.01）。结论肝纤维化过程中Hedgehog通路成员表达增高,抑制Hedgehog通路可抑制HSC活化,推测Hedgehog通路通过活化HSC促进肝纤维化的发生。