人白细胞介素18(hIL-18)的纯化及生物学活性的鉴定

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人IL 18(rhIL 18)蛋白 ,制备具有高纯度、高活性的rhIL 18。方法 :用IPTG诱导重组蛋白表达载体pKK2 2 3 3 hIL 18进行蛋白表达 ;菌体经超声破碎分离包含体 ,并对包含体进行洗涤、变性和复性处理 ,用DEAE SepharoseCL 6B阴离子交换柱纯化复性的rhIL 18;以人外周血单核淋巴细胞 ,通过T细胞增殖实验、1 2 5I UdR标记的细胞毒实验、ELISA方法检测细胞因子的产生量等方法 ,测定rhIL 18的生物学活性。结果 :在大肠杆菌中成功地诱导、表达了rhIL 18,SDS PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约 18 3kD处有一诱导蛋白带 ,Westernblot证明表达产物与抗IL 18单克隆抗体有特异性免疫反应 ;表达产物经纯化后纯度达 94 % ;表达的rhIL 18蛋白具有促进T细胞增殖、增强NK细胞细胞毒作用及诱导外周血单核淋巴细胞合成IFN γ的能力 ,基本上具有天然IL 18相同的生物学活性。结论 :为rhIL 18的获得及为进一步研究其生物学功能提供了一定的条件 ,并为将rhIL 18用于肿瘤的免疫生物治疗奠定了基础。