人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆、测序及表达

被引：27

作者：

施惠娟

范立强

魏东芝

袁勤生

孙建新

吴祥甫

机构：

[1] 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

[2] 中国科学院上海生物化学研究所

来源：

生物化学与生物物理学报 | 1999年 / 01期

关键词：

铜锌超氧化物歧化酶；表达栽体；基因克隆；基因表达；大肠杆菌;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ），以人胎肝组织总ＲＮＡ为模板，扩增了人铜锌超氧化物歧化酶（ｈＣｕ，ＺｎＳＯＤ）的ｃＤＮＡ，并进行序列分析，将该ｈＣｕ，ＺｎＳＯＤｃＤＮＡ重组到Ｔ７启动子控制下的分泌型表达载体ｐＥＴ２２ｂ（＋）中，构建表达质粒ｐＥＴＳＯＤ，并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。ＳＤＳＰＡＧＥ及蛋白质印迹分析表明，经１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基硫代 β Ｄ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后，可高效表达一分子量为１９ｋＤ的蛋白质，与抗人ＳＯＤ多抗有特异的免疫反应，表达量约为菌体总蛋白质的３０％，具有特异性ＳＯＤ酶活性，酶活力可达１７９７ｕ／ｍｌ培基。

引用

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