梭子蟹变应原的分离、纯化与鉴定

目的对梭子蟹(Portunus pelogicus(Linnaeus))变应原进行分离,鉴定其主要及次要变应原,采用蛋白纯化技术获取梭子蟹天然的主要变应原并进行鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供理论依据。方法取常规方法制备梭子蟹浸出液,经SDS-PAGE分离,测定各组分的相对分子量;同时用26例对蟹过敏的病人血清进行Western blot,鉴定其主要及次要变应原;利用快速制备液相色谱(FPLC)纯化技术(凝胶过滤层析和离子交换层析)获取主要变应原并作鉴定。结果SDS-PAGE显示梭子蟹有19条可辨蛋白带,分子量在13000～90000之间,其中主带有9条,分子量是20900、24200、27100、29200、33700、38900、48700、74700、89100;Westernblot结果表明,26例蟹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有5条致敏条带,其中分子量在74400、48700的是主要变应原,阳性反应率均为100%;纯化后获取了74400、48700的主要变应原;经过免疫鉴定证实其具有免疫活性。结论梭子蟹74400和48700的变应原为主要变应原,层析技术可以对分子量为74400和48700的主要变应原成分进行纯化。