整合素αMβ2 I-结构域的基因合成和蛋白表达

被引：2

作者：

侯晓敏 ^{[1
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袁彩 ^{[1
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彭奇 ^{[1
]}

陈明晃 ^{[1
]}

黄明东 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国科学院福建物质结构研究所,结构化学国家重点实验室

[2] 中国科学院研究生院

来源：

生物技术通讯 | 2009年 / 20卷 / 01期

关键词：

αMβ2 I-结构域; 整合素; DNAWorks; 肽指纹图谱;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

目的:利用大肠杆菌表达系统表达整合素αMβ2 I-结构域,并对其进行纯化。方法与结果:利用DNAWorks在线引物程序设计经过密码子优化的整合素αMβ2 I-结构域的寡核苷酸序列;采用PCR介导的基因拼装法合成αMβ2 I-结构域DNA模板,将其克隆至原核表达载体pET11d-6h上,并转化大肠杆菌,获得表达菌株;经IPTG诱导,αMβ2 I-结构域在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,表达产物经Ni-NTA琼脂糖层析柱纯化后,纯度达到90%以上;电喷雾电离质谱测定表明纯化所得的蛋白精确的相对分子质量为23720.0,与预期值相符;肽指纹质谱图谱鉴定其为目的蛋白。结论:αMβ2 I-结构域的高效表达,为进一步研究其与配体的结合及其复合物晶体结构奠定了基础。

引用

页码：8 / 11

页数：4

共 2 条

[1]

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[2]

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