抗SSA表位特异性单链噬菌体抗体的可溶性表达及鉴定

被引：2

作者：

李鸿斌 ^{[1
,2
]}

张烜 ^{[1
]}

唐福林 ^{[1
]}

张奉春 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院风湿免疫科

[2] 内蒙古医学院附属医院风湿免疫科

来源：

中华内科杂志 | 2010年 / 07期

关键词：

抗体; 噬菌粒; 表位; 可溶性表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

R392 [医学免疫学];

学科分类号：

100108 [医学免疫学];

摘要：

目的获得可溶性抗人SSA抗原表位特异性单链抗体(ScFv)。方法以赖氨酸为支架八倍体合成3条相对分子质量为60 000的SSA抗原氨基酸多肽链(MAP):MAP 482～493(P1表位)、MAP 310～323(P2表位)和MAP 230～241(P3表位)。以P1～P3表位为包被抗原,富集筛选相应的噬菌体单克隆抗体(McAb);阳性克隆特异性、亲和力和序列分析鉴定;表位特异性MeAb可溶性表达和鉴定。结果 5轮筛选后,获得了抗3种表位抗体的含完整插入片断的克隆株,具有较高亲和力和特异性。抗P1～P3抗体融合蛋白与相应表位反应的410 nm吸光度值分别为1.43±0.23、0.82±0.31、0.80±0.25,组间交叉反应差异有统计学意义(P值均小于0.01)。其中3个克隆表位特异性McAb-ScFv克隆成功,可溶性表达并纯化。以Hep-2细胞为底物,间接免疫荧光法(IIF)检测显示,可溶性ScFv抗体具有在体活性。结论筛选获得的阳性克隆成功,可溶性表达并具有较好的亲和力、特异性和在体活性,可胜任靶器官的表位表达情况的检测。

引用

共 4 条

[1]

类风湿关节炎合并溃疡性结肠炎及风湿性心脏病一例[J] 中华风湿病学杂志 2003, 07

[2]

SSA抗原及其不同阳性表位的临床意义 [J].

李娅杰 ;

刘莉 ;

张奉春 .

中华内科杂志, 2003, (03)

[3]

Perspectives of immobilized-metal affinity chromatography[J] Vladka Gaberc-Porekar;Viktor Menart Journal of Biochemical and Biophysical Methods 2001,

[4]

Human Anti-Ro Autoantibodies Bind Multiple Conformational Epitopes of 60-kD Ro Autoantigen[J] Shu-Cai Huang;R. Hal Scofield;Biji T. Kurien;John B. Harley Journal of Clinical Immunology 1997,

← 1 →