EHECO157∶H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的基因克隆、表达与纯化

被引：5

作者：

马颖

毛旭虎

邹全明

易勇

程建平

曾明

张卫军

机构：

[1] 第三军医大学检验系临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心

来源：

中华微生物学和免疫学杂志 | 2006年 / 02期

关键词：

肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7; 志贺样毒素B亚单位(Stx2B); 基因克隆; 原核表达; 纯化;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin2B,Stx2B),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Western blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2b基因约210bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coliBL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1%。结论EHEC O157∶H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,有利于进一步的生物学性质研究。

引用

页码：155 / 158

页数：4

共 4 条

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