Y27632对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节神经元轴突再生的影响

目的:探讨Rho蛋白激酶Ⅱ(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinaseⅡ,ROCKⅡ)特异性抑制剂Y-27632对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节(dorsal root ganglion,DRG)神经元轴突再生和延长的影响。方法:取新生(<5d)SD大鼠胸腰段DRG神经元进行原代培养、提纯和鉴定。将健康雌性SD成年大鼠15只随机分为脊髓损伤组、假手术组和正常组,每组5只;用WD法制成T9平面脊髓损伤动物模型,造模7d后取T8～T10节段脊髓制作脊髓提取液。将新生大鼠DRG神经元分为5组进行培养:A组,DRG神经元+PBS;B组,DRG神经元+正常组脊髓提取液;C组,DRG神经元+假手术组脊髓提取液;D组,DRG神经元+损伤脊髓提取液;E组,DRG神经元+损伤脊髓提取液+不同浓度(5、10、20、30、40、50μmol/L)Y27632。培养2d后观察并比较各组新生大鼠DRG神经元轴突平均长度和微管(TubulinβⅢ)荧光表达强度。结果:A、B和C组平均神经轴突长度及轴突远端tubulinβⅢ表达强度比较无统计学差异(P>0.05);D组明显减小,与A、B和C组分别比较有统计学差异(P<0.05)。5、10μmol/LY27632治疗组平均轴突长度以及轴突远端和生长锥tubulinβⅢ表达强度比D组有所增加(P<0.05),10μmol/LY27632治疗组增加更明显,但小于A、B和C组(P<0.05)。20～50μmol/LY27632治疗组平均轴突长度以及轴突远端和生长锥tubulinβⅢ表达强度三组间比较无统计学差异(P>0.05);与5～10μmol/LY27632治疗组、D组比较明显增加(P<0.05);与A、B、C组比较平均轴突长度无统计学差异(P>0.05),平均荧光密度明显增加(P<0.05)。结论:损伤脊髓提取液能明显抑制新生大鼠DRG神经元轴突生长,导致轴突回缩。加入5～10μmol/LY27632能促进轴突生长,20～50μmol/LY27632更能明显促进轴突生长。