siRNA对神经胶质瘤细胞株U251 bcl-2基因表达的抑制

目的 :研究siRNA(smallinterferenceRNA)对bcl- 2基因表达的抑制作用。方法 :依据Ambion公司在网上提供的设计软件 ,设计合成以bcl- 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入U2 5 1细胞株 ,以未转染细胞以及bcl- 2的反义药物G3139为对照 ,经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制以及流式细胞仪检测细胞周期的改变 ,用RT -PCR和免疫组织化学法检测siRNA对bcl- 2表达的抑制作用。结果 :MTT显示各时点细胞生长以及存活率 ,在siRNA 2、3、5、6与siRNA 1、4组以及对照组和脂质体组间均有显著差异 (P <0 0 5 )。siRNA 1、4组与对照组和脂质体组也有差异 (P <0 0 5 )。siRNA 1- 6组与反义组在 2 4和 4 8h均有显著差异 (P <0 0 5 ) ,在 72h无显著差异 (P >0 0 5 )。RT -PCR以及免疫组织化学法显示 ,siRNA 2、3、5、6组bcl- 2基因表达明显低于对照组、脂质体组、反义组以及siRNA 1、4组 (P <0 0 5 )。流式细胞仪检测细胞周期结果显示 ,siRNA 1- 6组以及反义组细胞阻滞于S期。结论 :体外转录合成的siRNA可抑制U2 5 1细胞bcl- 2基因的表达 ,效率可达 5 0 %以上。