人TIMP-3 cDNA的克隆、表达及其抗血管生成作用

从人新鲜的胎盘组织中提取总ＲＮＡ，以ＲＴ－ＰＣＲ法获取了人组织金属蛋白酶抑制剂－３（ＴＩＭＰ－３）成熟蛋白的ｃＤＮＡ。序列分析表明，ＴＩＭＰ－３成熟蛋白含有１８８个氨基酸残基，其中１２个半胱氨酸残基在ＴＩＭＰ家族中高度保守。将人ＴＩＭＰ－３ｃＤＮＡ插入含Ｔ７启动子的质粒ｐＥＴ－２４（ａ＋）构建表达质粒ｐＥＴ－ＴＩＭＰ３，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３），筛选表达菌株ＢＬＴＩＭＰ３。表达菌株经１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导表达３～５ｈ后，产生了大量的重组人ＴＩＭＰ－３蛋白，并形成包含体。凝胶自动扫描分析表明，表达量约占菌体总蛋白质的３０％以上。初步纯化和复性的ＴＩＭＰ－３蛋白具有显著的抗鸡胚绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）血管生成作用。此研究为进一步研究人ＴＩＭＰ－３结构与功能打下了良好的基础。