RT-PCR及RFLP分析技术对鸡传染性支气管炎病毒的诊断和S1基因分型的研究

本研究使用分别扩增整个S1糖蛋白基因 （引物A）和S1糖蛋白基因N_端高变区Ⅰ （引物B）的 2对引物对 3个IBV标准株M41、Connecticut、Arkansas及 5个地方分离株 （C60 ,D41A ,D41B ,A112 1,A1171）进行RTPCR扩增。用引物A时 ,有 5个IBV毒株扩增到目的片段 （172 0bp） ;用引物B时 ,所有 8个IBV毒株均得到与预计大小相符的目的产物 （2 2 8bp）。对 172 0bp的PCR产物用限制性内切酶HaeⅢ进行酶切 ,结果得出 3个不同的RFLP图谱 ,其中M41、Connecticut、D41B具有相同的HaeⅢ酶切图谱。Arkansas和D41A则分别具有互不相同的图谱 ;对 2 2 8bp的PCR产物进行DdeⅠ、RsaⅠ限制性内切酶消化 ,根据它们的RFLP图谱 ,8个IBV毒株可分为 5个基因型。综合 2对引物的PCR产物的RFLP分析结果 ,8个IBV毒株可分为 7个基因型 ,分型的结果与传统的血清学方法吻合。本研究建立的方法和技术具有快速、简单、特异、灵敏等优点 ,为现场流行毒株的定型（基因型 /血清型 ）及其S1基因变异的跟踪研究以及更有效防制传染性支气管炎奠定了基础。