IDENTIFICATION OF LYSINE AND ARGININE RESIDUES AS INHIBITORY CENTRES OF PROTEASE INHIBITORS WITH AID OF MALEIC ANHYDRIDE AND 2,3-BUTANDIONE

Die folgenden Inhibitoren haben nach Umsetzung mit Maleinsäureanhydrid ihre Hemmwirkung gegenüber den angegebenen Enzymen verloren: Inhibitor aus Pankreas von Schwein, Hund und Katze (Trypsin); Meerschweinchen-Samenblasen II, Hirudin und Limabohnen (Trypsin und Plasmin); Lunge von Rind und Schaf (Trypsin, Plasmin, Kallikrein und Chymotrypsin). Die antichymotryptische Aktivität des Inhibitors aus Limabohnen wird durch die Acylierung der Aminogruppen nicht beeinflußt. Die genannten Inhibitoren werden in saurer Lösung deacyliert, wobei sie ihre Aktivität zurückgewinnen. Die Poly-maleoyl-Derivate der Inhibitoren aus Weißbohnen und Meerschweinchen-Samenblasen besitzen noch etwa 1/3 der antitryptischen Aktivität der nativen Inhibitoren. Der Verlust der Hemmwirkung gegenüber Trypsin bzw. Plasmin und Kallikrein nach der Umsetzung mit Maleinsäureanhydrid wird auf die Acylierung der Aminogruppe eines Lysinrestes zurückgeführt, der sich im reaktiven Zentrum des Inhibitors befindet.Einen Argininrest im reaktiven Zentrum besitzen die folgenden Inhibitoren: Inhibitor aus Schafs-pankreas, Gl. submand. vom Hund, Sojabohnen, Hühnereiklar, Weizenkeimen, Roggenkeimen, Kartoffeln, Erdnüssen sowie der Inter-oc-Trypsin-inhibitor aus Humanserum. Die Polymaleoyl-Derivate dieser Inhibitoren, die dieselbe antitryptische Wirkung wie die nativen Inhibitoren besitzen, werden bei der Umsetzung mit einem Butandion-(2.3)-Reagens relativ rasch und irreversibel inaktiviert. Dieses Reagens modifiziert nach der Acylierung der Aminogruppen der Inhibitoren spezifisch die Guanidinogruppen der Argininreste. Die Antiplasminaktivität der Inhibitoren aus Gl. submand. vom Hund, Sojabohnen und Erdnüssen ist nach Acylierung der Aminogruppen ebenfalls nicht vermindert; sie nimmt jedoch bei der Einwirkung des Butandion-(2.3)-Reagens auf die Polymaleoyl-Derivate dieser Inhibitoren parallel zur Antitrypsinaktivität ab. © 1969, Walter de Gruyter. Alle Rechte vorbehalten.