泽泻α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选及其活性研究

本文以江西省资源丰富的泽泻Alisma orientalis (Sam.) Juzep.为研究对象,旨在进行泽泻α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选及其活性研究。研究工作由5部分组成： 1.对经典的pNPG法进行改良,以小鼠小肠α-葡萄糖苷酶为反应酶,固定反应温度37℃、pH6.8,建立体外α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型。该模型的优化条件为：反应时间10min,酶液添加量20μL,底物添加量20μL。在此条件下,酶活力平均值为85.6U。二甲基亚砜的终浓度宜控制在0.4%以下。筛选结果显示,泽泻正丁醇部分体外具有较强的小鼠小肠α-葡萄糖苷酶抑制活性,IC50为126μg/mL,阿卡波糖(阳性对照)IC50为251μg/mL。 2.采用硅胶柱层析法对泽泻正丁醇部分进行分离,得到六组分(Fr.1, Fr.2, Fr.3, Fr.4, Fr.5, Fr.6),应用体外α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型对六组分进行活性筛选,结果显示Fr.1体外酶抑制活性最高为66.1%,高于阿卡波糖的抑制活性(51.4%),泽泻正丁醇部分的抑制率为56.30%。 3.应用GC/MS分析泽泻正丁醇部分的化学组成。结果总共确认了23个化合物,其中以N,N-二甲基-1,3-二氨基丙烷的含量为最高,分析出萜类物质：α-萜品烯、4-萜烯醇、萜品油烯。 4.以阿卡波糖为阳性对照,考察浓度为0.002-20.000mg/mL的泽泻正丁醇部分对小鼠蔗糖酶、麦芽糖酶和猪胰腺α-淀粉酶抑制活性。结果表明：随着样品浓度的增加,离体小鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶的酶活随之降低,抑制作用呈现一定剂量依赖性。泽泻正丁醇部分的IC50分别为0.862mg/mL(蔗糖酶)、0.522mg/mL(麦芽糖酶),阿卡波糖的IC50分别为0.113mg/mL(蔗糖酶)、10.521mg/mL(麦芽糖酶)。泽泻正丁醇部分对猪胰腺α-淀粉酶的抑制活性很小(2.31%以下),而阿卡波糖表现出极强的α-淀粉酶抑制活性,抑制作用呈现剂量依赖性,最高抑制率为98.59%。昆明小鼠连续灌胃10天后,泽泻正丁醇部分和阿卡波糖都能有效抑制小鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶活性。和生理盐水组比较,泽泻正丁醇部分(P<0.05)能显著的抑制小鼠小肠蔗糖酶活性。 5.利用大鼠离体小肠囊模型,考察泽泻正丁醇部分及其分离组分对离体小肠葡萄糖吸收的影响。结果表明终浓度为0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000mg/mL的泽泻正丁醇部分对离体小肠葡萄糖吸收的抑制作用高于阿卡波糖的最佳抑制作用,但是抑制率和样品浓度不呈现相关性。泽泻正丁醇部分及其分离组分对离体小肠葡萄糖吸收的抑制活性大小为,泽泻正丁醇部分最大,Fr.1次之。