本研究以交泰丸“交通心肾”,治疗失眠为切入点,在课题前期研究的基础上,通过水煎、醇提、超临界CO2萃取将交泰丸分为水溶部分、乙醇可溶部分、挥发油部分,将交泰丸不同提取部分进行镇静催眠的药理实验,观察它们对小鼠的自主活动影响和对阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠的影响。同时对不同的提取部分进行化学成分分析。然后通过分析化学成分与药效的相关性,探明交泰丸镇催睡眠的有效成分,为交泰丸临床运用和进一步开发打下基础。
实验通过水煎、乙醇提取、超临界CO2萃取方法将交泰丸分为水煎液、醇提液、超临界CO2萃取液三种提取液。将SPF级KM小鼠,随机分成对照组、水煎组、醇提组、超临界C02萃取组。各组分别以低剂量(0.3125g／kg)、中剂量(0.625g／kg)、高剂量(1.25g／kg)交泰丸提取液灌胃给药,生理盐水对照组按照低剂量组给药量(0.3125g／kg)等量给予0.9%生理盐水灌胃。观察各给药组对小鼠自主活动的影响(包括小鼠的活动次数及站立次数)以及对阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠的影响(包括小鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间)。分析不同提取方式镇静催眠的药效差异。在此基础上,采用高效液相色谱分析法,检测交泰丸不同提取液中桂皮醛、肉桂酸、盐酸小檗碱的含量,分析不同提取方式对其含量的影响。结合交泰丸不同提取液的镇静催眠药效和化学成分,分析两者之间的关联,最终探明交泰丸镇静催眠的有效成分。实验结果如下：
1．交泰丸不同提取液对小鼠自主活动及阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠影响的结果
与生理盐水组相比较,交泰丸不同方式的提取液(水煎液、醇提液、超临界C02萃取)均能抑制小鼠的自主活动,协同戊巴比妥钠发挥镇静催眠作用。其中超临界CO2萃取组要优于水煎组和醇提组。
2.交泰丸不同提取液中桂皮醛、肉桂酸、盐酸小檗碱含量测定
采用高效液相色谱分析法,色谱柱：ArcusEP-C18,5μm,4.6×150mm；柱温：室温；流速1ml／min.
桂皮醛色谱条件为流动相：乙腈：水(30：70)；检测波长：290nm；
肉桂酸色谱条件为流动相：乙腈：水(0.1%磷酸)40：60；检测波长：267nm；
盐酸小檗碱色谱条件为流动相：乙腈：水(0.033mol／L磷酸二氢钾的水溶液)25：75；检测波长：346nm；
结果,交泰丸不同提取液中,交泰丸超临界CO2萃取液中桂皮醛、肉桂酸、盐酸小檗碱的含量高于交泰丸醇提组和水煎组。交泰丸水煎液中盐酸小檗碱含量高于交泰丸醇提组。
3.化学成分是方药发挥作用的物质基础。我们在实验中发现,交泰丸不同方式的提取液中,超临界CO2萃取液镇静催眠活性最强,而其所含盐酸小檗碱、肉桂酸和桂皮醛的含量也是最高的。化学成分与药效呈正相关性,说明盐酸小檗碱、肉桂酸和桂皮醛可能是交泰丸镇静催眠的有效成分。
