欧李茎尖超低温保存及遗传变异分析

本研究的目的是建立起欧李(Prunus humilis Bunge)超低温保存体系,并对欧李超低温保存后的遗传变异情况进行检测。以玻璃化法及包埋玻璃化法两种不同超低温保存方法对欧李茎尖进行超低温保存,并初步建立起欧李茎尖的超低温保存体系。建立起欧李茎尖单芽系,并以此为材料进行欧李超低温保存后遗传变异研究。结果表明: (1)使用玻璃化法进行欧李茎尖超低温保存的欧李茎尖的再生率高于使用包埋玻璃化法进行的欧李茎尖的再生率,其再生率高达83.9 %。 (2)较为适合的欧李超低温保存体系(玻璃化法超低温保存):2.0～3.0 cm的带芽茎段在含有0.5 mg/L BA和2 M的甘油的B5培养基上室温(25℃)下预培养3 d ,切取1.5～2.0 mm的茎尖在装载液中处理10～20 min,0℃下玻璃化液(PVS2)处理60 min,投入到液氮保存至少24 h后,40℃水浴化冻1 min,在含有1.2 mol/L蔗糖的B5液中洗涤40 min(每10 min换一次洗涤液),然后接种于附加0.5 mg/L BA的B5培养基上,暗培养3 d后转移到正常光下,再生率达83.9 %,再生植株生长和分化正常。 (3)经AFLP分析表明在超低温保存后欧李的基因组有两个位点发生了变异,约占所有检测位点的6.2 %。 (4)经MSAP分析表明在超低温保存后欧李的基因组甲基化状态发生了变化:第一次超低温保存后发生DNA甲基化状态变化的数量基本上等同于第二次超低温保存后发生变化的数量。1/3的甲基化状态发生变化的位点的甲基化模式似乎存在着累加的效应,另外,约有1/3的甲基化状态发生变化的位点的甲基化模式可以通过无性繁殖的方式传给下一代。