五味子质量控制方法研究

本研究分别建立了五味子药材GC和HPLC色谱指纹图谱,并对药材质量进行了评价。分别建立了五味子药材挥发油中4种成分的同时含量测定,药材中10种木脂素成分的同时含量测定,药材中3种脂肪酸的同时含量测定方法。较系统地对五味子药材进行了质量控制方法研究。以上方法也为区别南、北五味子提供了依据,为南、北五味子的合理使用提供了参考。 建立了五味子药材GC色谱指纹图谱,并指认了其中的5种成分。采用DB-17石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm）,以N2为载气,流速为1.2mL·min-1,分流比为50∶1,进样口温度和检测器温度分别为230℃和250℃,升温程序为:50℃为起始温度维持2min,以10℃·min-1升温至130℃,维持20min,以30℃·min-1升温至190℃,维持6min,再以10℃.min-1升温至210℃,维持3min。对14批北五味子和12批南五味子药材进行GC色谱指纹图谱分析。对五味子药材GC指纹图谱获得的色谱峰相对峰面积进行聚类分析。将14批北五味子药材分为2类,其中Ⅰ类为推荐品,Ⅱ类为一般品。取Ⅰ类中12批药材,建立共有模式,采用药典委员会规定的色谱指纹图谱处理软件,计算各样品与共有模式间的相似度,结果相似度在0.90以上的五味子药材为推荐药材。将12批南五味子药材分为2类,其中Ⅰ类为推荐品,Ⅱ类为一般品。取Ⅰ类中Ⅱ批药材,建立共有模式,采用药典委员会规定的色谱指纹图谱处理软件,计算各样品与共有模式间的相似度,结果相似度在0.90以上的五味子药材为推荐药材。同时利用GC色谱指纹图谱对北五味子和南五味子进行了鉴定分析。 建立了五味子药材HPLC色谱指纹图谱,并指认了其中的13种成分。采用Luna C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为水（A）-乙腈（B）,梯度洗脱程序为:0-20min,45%B～65%B;20-26min,65%B;26-50min,75%B。检测波长220nm。对14批北五味子药材进行HPLC色谱指纹图谱分析。将14批北五味子药材分为2类,其中Ⅰ类为推荐品,Ⅱ类为一般品。取Ⅰ类中13批药材,建立共有模式,采用药典委员会规定的色谱指纹图谱处理软件,计算各样品与共有模式间的相似度,结果相似度在0.90以上的五味子药材为推荐药材。 建立了五味子药材挥发油中4种成分的同时含量测定方法。采用DB-17石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm）,以N2为载气,流速为1.2mL·min-1,分流比为10∶1,进样口温度和检测器温度分别为230℃和250℃,检测器为氢火焰离子化检测器（FID）,升温程序为:50℃为起始温度维持2min,以10℃·min-1升温至130℃,维持5min。对14批北五味子药材挥发油中α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬烯和乙酸龙脑酯进行同时含量测定,其线性范围分别为0.020～0.205mg·mL-1（r=0.9998）,0.006～0.104mg·mL-1（r=0.9993）,0.006～0.162mg·mL-1（r=0.9994）和0.040～1.000mg·mL-1（r=0.9993）;平均回收率分别为100.8%（RSD=1.1%）,98.7%（RSD=2.9%）,99.4%（RSD=0.9%）和96.4%（RSD=0.4%）。该方法简便、快捷、重复性好,为五味子药材的质量控制提供了方法。 建立了五味子药材中10种木脂素成分的同时含量测定方法。采用Luna C18柱（250mmm×4.6mm,5μm）,流动相为水（A）-乙腈（B）,梯度洗脱程序为:0-20min,45%B～65%B;20-26min,65%B;26-50min,75%B。检测波长220nm,流速为0.8mL·min-1,柱温30℃。对12批北五味子药材中的10种活性成分五味子醇甲、戈米辛-D、戈米辛-J、五味子醇乙、前戈米辛、当归酰戈米辛-H、巴豆酰戈米辛-P、五味子甲素、戈米辛-N和五味子乙素进行同时含量测定,其线性范围分别为20～200μg·mL-1（r=0.9999）,2～20μg·mL-1（r=0.9998）,4～40μg·mL-1（r=0.9999）,13.3～133.3μg·mL-1（r=0.9999）,4～40μg·mL-1（r=0.9995）,6.25～62.5μg·mL-1（r=0.9999）,6.67～66.7μg·mL-1（r=1.0000）;4～40μg·mL-1（r=0.9999）,4～40μg·mL-1（r=0.9997）和10～100μg·mL-1（r=1.0000）;平均回收率分别为99.3%（RSD=2.5%）,100.2%（RSD=2.5%）,102.1%（RSD=1.6%）,98.5%（RSD=2.4%）,96.5%（RSD:3.2%）,99.4%（RSD=2.8%）,99.1%（RSD:2.7%）,97.5%（RSD=2.5%）,101.9%（RSD=3.1%）和100.6%（RSD=3.5%）。该方法简便、准确、重复性好,为五味子药材的质量控制提供了定量方法。 建立了五味子药材中3种脂肪酸的同时含量测定方法。采用DB-17石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm）,以N2为载气,流速为1.2mL·min-1,分流比为10∶1,进样口温度和检测器温度分别为250℃和250℃,检测器为氢火焰离子化检测器（FID）,升温程序为:150℃为起始温度,以5℃·min-1升温至250℃。对14批北五味子药材中棕榈酸甲酯、油酸甲酯和亚油酸甲酯进行同时含量测定,其线性范围分别为0.01～0.1mg·mL-1（r=0.9997）,0.038～0.380mg·mL-1（r=0.9997）和0.215～2.15mg·mL-1（r=0.9992）;平均回收率分别为99.4%（RSD=2.4%）,96.3%（RSD=2.4%）和96.4%（RSD=2.1%）。该方法简便、快捷、重复性好,可以作为五味子药材脂肪酸定量方法。