化疗对血瘀证影响的临床观察及活血药对肺癌生长、转移影响的实验研究

中医理论认为血瘀证与肿瘤的发生发展密切相关,并且具有“浓、粘、凝、聚”的血瘀状态可以促进肿瘤的转移。因此根据有是证用是药的原则,活血化瘀药一直广泛应用于肿瘤的治疗当中。然而现代一些有关肿瘤临床和实验的研究结果表明某些活血化瘀药可能促进肿瘤的转移。为此,部分医生对应用活血化瘀药产生了抵触。那么活血化瘀药究竟是起怎样的作用?化疗药物和活血化瘀药联合作用是协同还是拮抗?其作用机制是怎样的?由于活血化瘀药种类繁多、作用时间和剂量各异、配伍药物不同等因素均可影响药物的功用,很难得出客观准确的结论。导师既往的研究结果提示活血化瘀药对肿瘤细胞的侵袭转移可能因条件的不同而既可能表现为抑制作用,又可能表现为促进作用,其作用机制的复杂性可见一斑,有待于进一步深入探讨。 本课题是在导师前期工作的基础上依托国家自然科学基金展开的。我们对60例中晚期非小细胞肺癌患者进行了临床观察,观察他们化疗前后单证证型的变化以及血瘀证程度变化,结果表明化疗后血瘀证患者比例明显增加,化疗药有加重血瘀证的趋势；在综合考虑各种因素影响的基础上设计了体内实验,选用行气活血、补血和血、活血疗伤、破血逐瘀四类活血化瘀药的代表——川芎、鸡血藤、苏木、水蛭分别作用于不同时期肺癌的动物模型,筛选出了一种对小鼠Lewis肺癌生长和转移干预作用最大的药物(苏木),然后进一步研究其联合化疗后对肿瘤生长和转移的影响及其作用机制。体内实验采用流式细胞术、酶联免疫吸附试验、实时定量PCR、等技术检测了CD44、P-选择素、CK18、CK19等相关指标,不仅从影响细胞黏附角度说明了苏木的抗肿瘤转移机制,而且通过检测肺癌微转移的指标证明了苏木抗转移的作用。 1主要研究结论 1.1非小细胞肺癌患者化疗前后证候分布及血瘀证程度变化的临床观察 我们在60例中晚期NSCLC患者2周期化疗前后分别按照各个证型的分类标准对其辨证分型,结果显示：2周期化疗后血瘀证的比例明显增加(P<0.01),痰热证、气滞证、热毒证比例有下降的趋势,气虚证、血虚证、阴虚证、阳虚证比例有上升的趋势,但均没有统计学意义(P>0.05)。凝血指标APTT、FIB、D-dimer有统计学差异(P<0.01),MCV检测值有统计学差异(P<0.05)。 1.2不同类型活血化瘀药对小鼠不同时期Lewis肺癌生长和转移影响的实验研究 选取临床常用且现代药理证实有抗肿瘤作用的川芎、鸡血藤、苏木、水蛭四种活血化瘀药对C57BL／6小鼠移植性Lewis肺癌肺转移模型进行干预,分三个时间点与模型对照组进行比较,动态观察各组抑瘤率和抑转移情况。结果：第5天,鸡血藤组和苏木组的瘤重与对照组相比差异有统计学意义(p<0.05),第10天,鸡血藤组、苏木组和水蛭组的瘤重与对照组相比差异有统计学意义(p<0.05),第21天,用药各组瘤重与对照组相比差异无统计学意义(p>0.05)。川芎组、苏木组肺转移灶数目与对照组相比差异有统计学意义(p<0.05)。结论：根据本实验四种活血化瘀药均有一定的抑瘤及抑制转移作用,但随着病期的进展作用逐渐减弱。从抑制肿瘤生长和转移两方面考虑,苏木作用最好。因此选择苏木进行下一步深入研究。 1.3苏木及苏木联合化疗对小鼠不同时期Lewis肺癌生长和转移影响的实验研究 采用体内实验方法于三个时间点动态观察对照组(NS)、苏木低剂量组(SML)、苏木高剂量组(SMH)、化疗+苏木低剂量组(CTX+SML)、化疗+苏木高剂量组(CTX+SMH)的抑瘤率、抑转移率,流式细胞术检测各组小鼠移植瘤组织中瘤细胞CD44的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清P-选择素浓度,实时定量PCR检测荷瘤小鼠骨髓CK18mRNA、CK19mRNA的表达。结果：苏木及苏木联合化疗对lewis肺癌生长及转移均有一定抑制作用,苏木联合化疗疗效优于单纯苏木治疗或化疗。苏木及苏木联合化疗可以抑制小鼠瘤细胞CD44、血清P-选择素等黏附因子的表达。通过检测CK18mRNA、CK19mRNA的表达,结果显示苏木及苏木联合化疗组可以不同程度地降低CK18mRNA、CK19mRNA的表达,从基因水平验证了苏木及苏木联合化疗抑制肿瘤转移作用的部分机理。结论：苏木可以抑制lewis肺癌的生长及转移,其抑制转移的机制可能是通过影响肿瘤与细胞外基质的黏附而起作用的。 2本研究的创新点和特色 本研究根据临床观察结果设计动物实验,分三个时间点动态观察活血化瘀药对肿瘤生长和转移的影响,把疾病看成是一个连续的不断发展变化的过程,将活血化瘀药治疗作用研究与肿瘤的不同分期相结合,据结果以选择药物的最佳作用时机；将活血化瘀药与化疗相结合,探讨两者之间的相互作用,为临床联合用药提供实验理论基础。本研究在观察肿瘤转移时,除了在解剖显微镜下数显性转移灶的个数外,对于隐匿的微转移,借鉴临床检测肿瘤微转移的方法和指标,采用实时定量PCR技术检测CK18mRNA、CK19mRNA的表达,做到了宏观和微观检测相结合。以上均是本研究的创新点和特色。