高血压病患者中医证候的血清蛋白质组学差异表达研究

背景:高血压病（Essential Hypertension,EH）是最常见的心血管疾病,以体循环动脉压增高为主要表现的临床综合征,占高血压患者的95%以上。同时,又是一种危险因素,与冠心病、脑卒中、心力衰竭和肾功能障碍密切相关,是导致心脑血管疾病死亡的主要危险因素之一。发病机制不明确,可能与交感神经活性亢进、肾素-血管紧张素-醛固酮系统过度激活、潴钠和排钠系统异常、胰岛素抵抗、血管重建、内皮细胞功能受损等因素相关。中医认为:其形成是一个长期的过程,由体质、情志、饮食、劳逸等多种因素交互作用所致。体质的阴阳偏盛或偏衰、禀赋不足、脏腑亏损为发病的内因;过度的精神紧张、情志的异常、饮食的偏嗜是发病的常见外因。病机根本为肝、脾、肾阴阳失调、运化失施,日久津血运行不畅,痰湿阻滞,脉络不利;或暗耗津血,营血受损,血脉瘀滞;或阴阳两虚,痰瘀痹阻,横窜经隧,并最终累及他脏发展成为胸痹、中风、昏厥等变证。目前不管是现代医学还是传统医学对其发病原因都不明确。蛋白质组学的出现,在探讨EH的发病机理、深入研究中医证候的本质、丰富中医辨证的手段等诸多方面,日益显现出其重要作用。 目的:研究EH中医不同证候患者血清蛋白质组学表达的差异,筛选EH不同中医证候特异蛋白标志物,寻找中医辨证的客观指标。 方法:对EH患者进行辨证分型,最后纳入EH肝胆湿热证（GDSR）40例、痰湿壅盛证（TSYS）40例、阴虚阳亢证（YXYK）15例,并随机选择健康体检人员（Health）39例。对所有入选人员血清蛋白质组学进行质谱分析（基质辅助激光解析电离飞行时间质谱MALDI-TOF-MS）。进一步运用Proteinchip Software3.2.0&Biomarker PatternsTM Software 5.0（BPS）软件对图谱进行分析,对数据进行筛选、建立决策模型。 结果: 1.所有入选的EH患者血清蛋白质谱与Health组比较共发现179个差异蛋白峰（P<0.05）,其中20个表达增高,表达降低的159个。进一步筛选时发现:分子量为4175.258m/z的蛋白峰在EH组中均呈现低水平表达,以相对强度值6.116为分界线,EH患者表达均在分界线以下,健康人表达均在分界线以上,可将所有EH患者血清质谱与健康人质谱完全区分开来。 2.GDSR组血清蛋白质谱与Health组比较共发现182个差异蛋白峰（P<0.05）,其中23个表达增高,表达降低的159个。 3.TSYS组血清蛋白质谱与Health组比较共发现168个差异蛋白峰（P<0.05）,其中15个表达增高,表达降低的153个。 4.YXYK组血清蛋白质谱与Health组比较共发现124个差异蛋白峰（P<0.05）,其中7个表达增高,表达降低的117个。 5.GDSR组与TSYS组蛋白质谱比较两组间有差异的蛋白质峰有46个（P<0.05）,其中GDSR组较TSYS组表达增高的有14个,表达降低的32个。 6.GDSR组与YXYK组蛋白质谱比较发现有差异的蛋白质峰有72个（P<0.05）,GDSR组较YXYK组表达增高的有26个,表达降低的46个。 7.TSYS组与YXYK组蛋白质谱比较发现两组间有差异的蛋白质峰有22个（P<0.05）,TSYS组较YXYK组表达增高的有3个,表达降低的19个。 8.BPS软件筛选GDSR证的最佳标志物。结果m/z为2487.19,9334.95,2238.14,6624.36,5903.54的5个蛋白峰为GDSR证的最佳标志物。这5个蛋白标志物组成的训练模型能很好的将GDSR证区分出来,该模型的敏感性Sensitive=86.667%,特异性Specificty=96.552%,假阳性率False positive rate=3.448%,假阴性率False negative rate=13.333%,Youden's index=83.219% 9.BPS软件筛选TSYS证的最佳标志物。结果显示m/z为3161.26,7922.98,7555.76,8030.79,3936.31的5个蛋白峰为TSYS证的最佳标志物,这5个蛋白标志物组成的训练模型能很好的将TSYS证区分出来,其敏感性Sensitive=96.552%,特异性Specificty=83.333%,假阳性率False positive rate=16.667%,假阴性率False negative rate=3.448%,Youden's index=79.885% 结论: 1.EH患者与健康人血清蛋白质谱之间差异蛋白峰所代表的蛋白质或多肽可能是EH发病相关蛋白。对其进行进一步分离与鉴定对揭示EH发病机制至关重要。 2.不同证候患者之间血清蛋白质谱中差异表达的蛋白峰,可能是其证候外在表现的内在物质基础。对差异蛋白的鉴定及功能的确定有望揭示中医证候的本质。 3.GDSR证和TSYS证特异蛋白标记物的筛选及证候模型的建立,在分子生物层面上为GDSR证和TSYS证的蛋白组学表达确立了客观标志。并为其辩证提供了更加客观可靠的手段。