药用植物三叶青的种质鉴定和组培快繁研究

三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels & Gilg)隶属于葡萄科(Vitaceae)崖爬藤属,是中国特有的民间药用植物。曾广泛分布于我国长江中下游及以南地区,野生资源丰富。我们的调查结果显示,由于过度利用和生境破坏,三叶青野生种群正逐渐消失。本研究利用DNA条形码技术和植物组织培养技术,对三叶青进行了种质鉴定和组培快繁研究,同时对三叶青的人工栽培条件进行了初步探索。主要研究结果如下： 1.条形码特征分析显示,rbcL、matK、trnH-psbA、ITS的变异位点数分别为18、39、64和236,平均种间遗传距离分别为0.0063、0.0049、0.0184和0.0745,平均种内遗传距离分别为0.0001、0.0002、0.0006和0.0036。物种系统学分析显示,rbcL、matK、trnH-psbA、ITS分别可以鉴定22.2%、61.1%、66.7%和93.8%的物种。在NJ、UPGMA、ML分析中,多片段条形码往往比单片段条形码具有更好的鉴别效果,三叶青可以被ITS或多片段条形码准确鉴定。本研究没有在4个条形码上发现明显的Barcoding gap,但种内和种间遗传距离存在显著性差异。根据研究结果,认为ITS及rbcL+matK+ITS是鉴定三叶青和其它崖爬藤属植物的最佳条形码。 2.增殖培养结果显示,BA对不定芽的增殖效果优于KT和CPPU。在培养基MS+BA4.0上不定芽增殖倍数达到7.27,但不定芽高度仅0.48cm。MS+BA0.5+ NAA0.1上平均不定芽高度达到2.69cm,但不定芽增殖倍数仅2.25。培养基MS+BA2.0、MS+BA2.0+NAA0.1和MS+BA4.0+NAA0.1既具有较高的不定芽增殖倍数(4.00-4.13),也具有较高的不定芽高度(0.95-1.25cm)。生根培养结果显示,在本研究所使用的4种生长素(2,4-D、IAA、NAA和IBA)中,IBA对不定芽的生根效果最好,三种浓度(0.5、1.0、2.0mg/L)下生根率都达到100%,平均根数分别为7.3、8.8、8.9。根据研究结果,MS+BA4.0和MS+BA2.0+NAA0.1可作为首选增殖培养基,1/2MS+IBA0.5为最佳生根培养基。 3.物候观察和人工栽培试验表明,三叶青在9月生长最旺盛,1月、2月、3月和12月基本停止生长；最佳株行距为0.1m×0.3m,最佳遮阴率为70%；搭架栽培不能显著提高三叶青的块根产量；在山区生地或半生地种植时可不施肥。