宝兴虎耳草活性成分的提取分离及其体外抗前列腺癌活性的初步研究

本研究的目的是拟从四川宝兴地区虎耳草中提取分离活性成分,并以DU145雄激素非依赖性人前列腺癌细胞为对象进行了初步抗癌活性研究。试验方法及结果如下： 1虎耳草有效成分的提取分离：方法：对新鲜虎耳草干品水煎醇沉,后经乙酸乙酯萃取得萃取物；应用硅胶吸附柱层析对乙酸乙酯萃取物进行分离纯化。筛选最佳的柱层析条件,上柱分离,收集各段馏分,并对各段馏分作中药化学成分的定性鉴定。结果：经薄层层析选定最佳流动相条件为乙酸乙酯：正己烷：甲醇(5.5：3.5：1)；经柱层析分离得到八个段,分别标记为F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8；各段主要成分集中在黄酮类及酚类物质。 2MTT实验：方法：采用MTT比色法测定虎耳草硅胶柱层析所得各段馏分对DU145细胞的增殖抑制作用。1、采用MTT法测定二甲基亚砜对DU145细胞的最高无毒浓度；2、各段馏分均以320mg/L、160mg/L,80mg/L,40mg/L,20mg/L的浓度给药,并且作用时间分别设定为24h、36h、48h三个时间段。结果：1、DMSO对细胞的最高无毒浓度为0.5%；2、除F1、F8作用效果不明显外,其余各段馏分均有不同程度抑制细胞增殖的作用,其中F3、F6、F7三段的量效关系以及时效关系最为显著,其IC50分别为55.63mg/L、50.02mg/L、102.2mg/L。 3细胞凋亡检测：方法：选择F7段作为研究对象,分别测定其在160mg/L,80mg/L,40mg/L三个浓度下,作用24h、36h、48h后,对于DU145凋亡的影响。结果：F7段具有促进癌细胞凋亡的作用,并且呈现正相关的量效关系和时效关系。 由以上结果可知,虎耳草经硅胶柱层析分离各段活性部位具有体外抑制DU145细胞增殖,促进其凋亡的作用,可作为抗前列腺癌的活性物质库。