重症急性胰腺炎相关性MiR-551b-5p对ICC细胞C-KIT基因的表达和细胞内钙离子浓度的影响

目的:通过研究重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis SAP)相关性miR-551b-5p对ICC细胞C-KIT基因、钙离子浓度的影响,来探讨SAP相关性miR-551b-5p影响胃肠道动力功能的机制。方法:1、Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICC)的分离培养,从SD乳大鼠中获取其小肠组织,显微镜下剥除小肠系膜、血管及小肠浆膜层,进一步剥除小肠黏膜及黏膜下层,在剩下的平滑肌层中获取ICC细胞并进行细胞培养。2、根据研究目的将分离培养的ICC细胞分为5组:A组:正常对照组;B组:MiR-551b-5p过表达组(转染MiR-551b-5p mimic);C组:MiR-551b-5p mimic阴性对照组;D组:MiR-551b-5p下调表达组(转染MiR-551b-5p inhibitor);E组:MiR-551b-5p inhibitor阴性对照组。3、上调和下调ICC细胞中特异性MiR-551b-5p表达前后的检测。a、RT-PCR测定ICC细胞中MiR-551b-5p以及c-KIT mRNA的表达,并根据以上分组每组重复3次。b、Western blotting检测ICC细胞中c-KIT蛋白,每组重复3次。c、激光共聚焦显微镜检测ICC细胞的形态学改变和细胞内钙离子浓度变化。以免疫荧光法检测c-KIT表达,Fluo-3AM法检测钙离子浓度。结果:1、和正常对照组相比,miR-551b-5p mimic组miR-551b-5p表达显著升高(P<0.01);miR-551b-5p inhibitor组miR-551b-5p表达显著降低(P<0.01);miR-551b-5p mimic组和miR-551b-5p mimic阴性对照组相比,miR-551b-5p表达显著升高(P<0.01);miR-551b-5p inhibitor组和miR-551b-5p inhibitor阴性对照组相比,miR-551b-5p表达显著降低(P<0.01)。2、和正常对照组相比,miR-551b-5p mimic组和miR-551b-5p inhibitor组c-KIT表达无明显差异(P>0.05)3、和正常对照组相比,miR-551b-5p mimic组细胞内钙离子浓度显著升高(P<0.05);miR-551b-5p inhibitor组细胞内钙离子浓度显著降低(P<0.05)。结论:1、SAP相关性miR-551b-5p的表达与ICC细胞内钙离子浓度的变化正相关,通过使ICC细胞内钙离子浓度的升高,使ICC细胞的起搏功能出现障碍,从而引起胃肠动力的障碍;2、SAP相关性miR-551b-5p的表达对ICC细胞中c-KIT表达无明显影响。