阳虚质慢性失眠患者NK细胞和T细胞的特征研究

目的:通过探索阳虚质慢性失眠患者的淋巴细胞亚群、NK细胞亚群及所含颗粒酶、穿孔素、NK细胞杀伤功能及分泌功能、Th1、Th2、Th17细胞亚群变化,从NK细胞和T细胞的角度分析阳虚质慢性失眠患者的免疫紊乱状态,为阳虚质慢性失眠的微观化辨证提供理论依据。方法:本研究为横断面研究,纳入心理睡眠门诊失眠病人及健康体检人群,根据失眠病史的有无分为慢性失眠组和正常对照组,并进一步将慢性失眠组分别分为阳虚质组、非阳虚质组两个亚组及阳虚质组、非阳虚质组偏颇体质组、平和质组三个亚组,收集一般资料、中医体质调查问卷、匹兹堡睡眠量表,使用流式细胞术检测淋巴细胞亚群检、NK细胞杀伤功能、NK细胞亚群及所含颗粒酶、穿孔素、Th1/Th2/Th17细胞亚群,使用Elisa法检测NK细胞分泌的INFγ、TNF a水平。对研究结果进行统计分析,比较慢性失眠组与正常对照组间,慢性失眠组两个亚组间及三个亚组间的一般资料、PSQI量表及上述检测指标的差异,并分析阳虚程度与失眠程度及上述检测指标的相关性。结果:1.淋巴细胞亚群:慢性失眠组(n=59)的淋巴细胞总数、NK细胞数、总T淋巴细胞数、抑制性/细胞毒性T细胞数、总B淋巴细胞数较正常对照组(n=30)下降。慢性失眠组内,在阳虚质组与非阳虚质组两组间比较中,阳虚质组的NK细胞数、NK细胞百分比较非阳虚质组下降,而总T淋巴细胞数、总T淋巴细胞百分比、辅助性T细胞数则较非阳虚质组上升。慢性失眠组内,在阳虚质组、非阳虚质偏颇体质组、平和质组三组间的比较中,阳虚质组的NK细胞百分比较平和质组下降。慢性失眠组中总T淋巴细胞数(r=0.273)、总T淋巴细胞百分比(r=0.37)与阳虚程度呈正相关关系,NK细胞百分比与阳虚程度呈负相关关系(r=-0.273)。2.NK细胞亚群及所含颗粒酶、穿孔素:CD56+CD16-NK细胞亚群:慢性失眠组(n=32)的CD56+CD16-NK细胞亚群百分比较正常对照组(n=28)升高。慢性失眠组内,在阳虚质组与非阳虚质组两组间的比较中,阳虚质组CD56+CD16-NK细胞亚群的颗粒酶百分比、穿孔素百分比、颗粒酶荧光强度均较非阳虚质组下降。慢性失眠组内,在阳虚质组、非阳虚质偏颇体质组、平和体质组三组间的比较中,阳虚质组的CD56+CD16-NK细胞亚群的颗粒酶百分比较平和质组下降,而阳虚质组的CD56+CD16-NK细胞亚群的颗粒酶荧光强度较非阳虚质偏颇体质组、平和质组下降。CD56+CD16+NK细胞亚群:慢性失眠组(n=32)的CD56+CD16+NK细胞亚群百分比较正常对照组(n=28)下降,该亚群所含穿孔素百分比及穿孔素荧光强度较正常对照组上升。慢性失眠组内,在阳虚质组与非阳虚质组两组间的比较中,阳虚质组的CD56+CD16+NK细胞百分比、颗粒酶百分比、穿孔素百分比、穿孔素荧光强度均较非阳虚质组下降。慢性失眠组内,在阳虚质组、非阳虚质偏颇体质组、平和体质组三组间的比较中,阳虚质组CD56+CD16+NK细胞亚群颗粒酶百分比较非阳虚质偏颇体质组、平和质组下降。阳虚质组CD56+CD16+NK细胞亚群穿孔素荧光强度较平和质组下降。CD56-CD16+NK细胞:慢性失眠组(n=32)的CD56-CD16+NK细胞的颗粒酶百分比较正常对照组(n=28)减少,而颗粒酶荧光强度、穿孔素荧光强度均较正常对照组增加。慢性失眠组内,在阳虚质组、非阳虚质组两组间的比较中,阳虚质组的CD56-CD16+NK细胞亚群的颗粒酶百分比、穿孔素百分比、穿孔素荧光强度均较非阳虚质组下降。慢性失眠组内,在阳虚质组、非阳虚质偏颇体质组、平和体质组三组间的比较中,阳虚质组的CD56-CD16+NK细胞颗粒酶百分比、穿孔素百分比均较非阳虚质偏颇体质组减少,而阳虚质组的CD56-CD16+NK细胞穿孔素荧光强度则较平和质组减少。慢性失眠组中,阳虚程度与CD56+CD16+NK细胞亚群百分比(r=-0.446)、CD56+CD16+NK细胞亚群颗粒酶百分比(r=-0.647)、CD56+CD16+NK细胞亚群穿孔素荧光量(r=-0.465)、CD56+CD16-NK细胞亚群颗粒酶荧光量(r=-0.504)呈负相关关系。3.NK细胞杀伤功能及分泌功能:慢性失眠组(n=8)的NK细胞杀伤率、NK细胞分泌的TNFα、IFNy与正常对照组(n=7)无明显差异。4.Th1、Th2、Th17 细胞亚群:慢性失眠组(n=58)的Th1/Th2比值较正常对照组(n=22)下降。在慢性失眠组内,在阳虚质组、非阳虚质组两组间的比较中,阳虚质组的Th1细胞百分比、Th2细胞百分比、Th17细胞百分比均较非阳虚质组下降。在慢性失眠组内,在阳虚质组、非阳虚质偏颇体质组、平和体质组三组间的比较中,阳虚质组Th1细胞百分比、Th2细胞百分比均较非阳虚质偏颇体质组下降,而阳虚质组Th17细胞百分比则较非阳虚质偏颇体质组、平和质组下降。慢性失眠组中,阳虚程度与Th1细胞百分比(r=-0.452)、Th2细胞百分比(r=-0.39)、Th17细胞百分比(r=-0.387)细胞亚群呈负相关关系(P<0.05)。结论:慢性失眠导致的免疫紊乱主要特征为NK细胞、T细胞数目的下降及相关功能亚群的偏移,其中的阳虚质慢性失眠还具有免疫激活能力下降的特征表现,且阳虚程度与上述指标变化程度存在相关关系,提示阳虚质慢性失眠是慢性失眠中免疫功能较易受失眠影响的一种类型。