冰川棘豆毒素的毒性及细菌降解研究

疯草是豆科黄芪属和棘豆属有毒植物的总称,也是世界范围内危害草原畜牧业最严重的一类毒草。在我国,疯草广泛分布于西北、华北和西南的广大草原,危害面积达1100万hm2。近年来,国内外在疯草的危害、有毒成分、毒理机制、防除和利用等方面的研究取得了重要进展,但迄今还没有控制疯草蔓延的特效方法,致使疯草中毒问题日趋严重,成为草原畜牧业的大患。冰川棘豆（Oxytropis.glacialis）是疯草的一种,也是青藏高原特有草种之一,主要分布在西藏阿里地区,本文就冰川棘豆毒素的毒性,苦马豆素（SW）的提取,2,2,6,6-四甲基哌啶酮（TMPD）和SW 的细菌降解等方面研究进行总结。 1.按体重0.38 g/（kg﹒d）给健康山羊灌服TMPD,试验的21 d 山羊出现中毒症状,42 d 后逐渐出现走路时容易跌倒,倒地后不易起立。血液RBC、LC 显著降低（P <0.05或P <0.01）,PCV、Hb 稍有降低,淋巴细胞空泡变性;血清UBN 含量、LDH 和ALT 活性升高（P <0.05 或P <0.01）,AMA 活性显著降低（P <0.05 或P <0.01）,表明TMPD 对心、肝、肾、脑等组织造成损害。病理组织学检查发现,小脑、大脑、肝等组织细胞出现空泡变性。山羊TMPD 中毒的症状、血常规指标、血液生化指标及病理变化与冰川棘豆中毒相似,证明TMPD 是冰川棘豆中的主要有毒成分之一。 2.家兔按10 g/（kg﹒d）饲喂冰川棘豆草粉,从第40 天起,试验组家兔开始出现以中枢神经系统机能紊乱为特征的中毒症状。从试验第4 天开始试验组家兔陆续出现淋巴细胞空泡变性,而在40 d 后才出现中毒症状,其他指标与山羊冰川棘豆中毒一致,说明家兔的耐受性较山羊高,也属敏感动物,其胃肠道内不可能存在降解冰川棘豆毒素的细菌菌株。试验性冰川棘豆中毒家兔血清AMA 活性明显下降,说明冰川棘豆的有毒成分中可能含有吲哚兹啶生物碱,动物冰川棘豆中毒是TMPD 和其他有毒成分共同造成的。 3.首次从冰川棘豆中提取纯化出SW。用甲醇提取冰川棘豆生物碱,提取率为5.5%。用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分段萃取,称重表明:冰川棘豆生物碱主要集中在正丁醇部分。薄层层析,Ehrlich’s 试剂显色,可以看出:氯仿部分含有10 种生物碱,乙酸乙酯部分含有7 种生物碱,正丁醇部分含有5 种生物碱。氯仿部分用于GC-MS 分析,共检测出17 种生物碱,其中已鉴定结构的有9 种,未鉴定结构的有8 种。取正丁醇部分进行柱层层析,梯度洗脱,分段收集,合并同类组分后,薄层层析监测,Ehrlich’s 试剂显色,显色明显的组分用氨性氯仿处理,减压油浴升华,得到白色针状结晶。白色针状结晶,经TLC、气相色谱、熔点检测,红外光谱、质谱、核磁共振谱等光谱鉴定,确定