目的：1.研究广藿香油及其主要单体成分广藿香醇和广藿香酮体外抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3、DU145的生长作用；2.以诱导肿瘤细胞凋亡为出发点,探讨其抑制PC3、DU145肿瘤细胞增殖的作用机制；3.通过Balb/c裸小鼠皮下种植PC3细胞进行实验,明确广藿香油体内抑制人雄激素非依赖性前列腺癌生长的效果。
方法：1.体外培养人雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3、DU145,以四甲基偶氮唑盐还原法(MTT)作为检测手段,观察不同浓度广藿香油、广藿香醇、广藿香酮对上述肿瘤细胞的生长抑制作用,计算出IC50；2.采用Balb/c裸小鼠建立前列腺癌PC3细胞体内模型,观察广藿香油经腹腔注射给药对模型小鼠的一般情况、小鼠体重、肿瘤体积、相对肿瘤增殖率T/C(%)的影响；3.应用透射电镜观察,细胞周期检测,Annexin V-FITC、PI双标记法流式细胞仪检测,Western Blot法检测不同浓度广藿香油、广藿香醇、广藿香酮对PC3、DU145肿瘤细胞凋亡形态、细胞周期、细胞凋亡率、凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、Bcl-2同源拮抗剂/Killer (Bak)、凋亡抑制蛋白Livin的表达的影响。
结果：广藿香油及其主要单体成分广藿香醇和广藿香酮对PC3、DU145肿瘤细胞生长具有不同程度的抑制作用,且作用效果呈时间-剂量依赖性。广藿香油、广藿香醇和广藿香酮对PC3细胞24h的IC50浓度分别为89.68μg/ml、167.64μg/ml和211.02μg/ml,48h的IC50浓度分别为79.89μg/ml、101.37μg/ml和105.44μg/ml;作用72h的IC50浓度分别为66.74μg/ml、60.37μg/ml和94.66μg/ml。广藿香油、广藿香醇和广藿香酮对DU145细胞24h的IC50浓度分别为109.64μg/ml、56.88μg/ml和649.41μg/ml,48h的IC50浓度分别为93.70μg/ml、63.31μg/ml和32.71μg/ml:作用72h的IC50浓度分别为86.88μg/ml、52.45μg/ml和36.83μg/ml。结果显示,广藿香油对PC3、DU145肿瘤细胞的增殖抑制作用优于广藿香醇和广藿香酮,广藿香醇对PC3、DU145肿瘤细胞的增殖抑制作用优于广藿香酮。透射电镜观察结果显示广藿香油、广藿香醇和广藿香酮能诱发PC3和DU145细胞出现典型凋亡形态学改变,流式细胞仪检测提示三种药物可阻滞细胞周期于G0/G1期或G2/M期,并使细胞凋亡率明显升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。Western Blot检测提示PC3和DU145细胞Caspase-3、Bax、Bak的表达增强,Livin、Bcl-2蛋白的表达下调。体内实验中,与阴性溶剂对照组比较,广藿香油具有抑制Balb/c裸鼠PC3肿瘤增殖作用,效应强度呈药物剂量依赖性。
结论：广藿香油及其主要成分广藿香醇、广藿香酮具有抑制人雄激素非依赖性前列腺癌PC3和DU145细胞增殖的作用,其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤细胞周期有关。广藿香油在Balb/c裸鼠体内具有延缓PC3肿瘤增殖作用。
