蜈蚣水提取物对胆管癌细胞株QBC939体内外抗肿瘤作用的实验研究及机制探讨

目的： 1.用光学显微镜、MTT、细胞集落试验及透射电镜等不同方法,观测不同浓度的蜈蚣水提取物对人胆管癌细胞株QBC939体外抑制作用。计算其IC50值。 2.建立胆管癌细胞株QBC939裸鼠皮下瘤模型,用10g/kg蜈蚣水提取物灌胃处理胆管癌细胞株QBC939移植瘤裸鼠,比较治疗组及对照组皮下瘤模生长情况。 3.取治疗组及对照组人胆管癌细胞株QBC939裸鼠皮下移植瘤瘤体行蛋白质组学分析,寻找差异性蛋白。 4.根据蛋白质组学结果,取胆管癌细胞株QBC939裸鼠皮下瘤体行BCL-2及BAX的半定量RT-PCR及Western blot分析,探讨蜈蚣水提取物促进胆管癌细胞凋亡的可能机制。 方法： 1.光镜观测蜈蚣水提取物对人胆管癌细胞株QBC939作用后的形态学改变及集落变化,计算其IC50值。透射电镜观测IC50值蜈蚣水提取物处理人胆管癌细胞株细胞QBC93948小时,肿瘤细胞结构改变情况。 2.建立人胆管癌细胞QBC939裸鼠皮下移植瘤模型,移植瘤术后第12天,采用10g/kg蜈蚣水提取物灌胃处理移植瘤裸鼠,每日一次,共21次。观察记录肿瘤变化情况绘制生长曲线图。移植瘤术后第35天解剖移植瘤裸鼠,观测皮下移植瘤体积、重量及H.E染色情况。 3.用蛋白质组学技术检测蜈蚣水提取物处理前后两组人胆管癌细胞QBC939皮下移植瘤蛋白表达的差异。 4.上述两组人胆管癌细胞QBC939皮下移植瘤的标本行RT-PCR及Western blot检测Bcl-2及Bax的变化情况。探讨蜈蚣水提取物促进胆管癌细胞凋亡的可能机制。 结果： 1.蜈蚣水提取物有抑制胆管癌QBC939细胞生长的作用,随着蜈蚣水提取物浓度逐渐增加,其抑瘤作用递增。其IC50值为12.5mg/ml.蜈蚣水提取物能抑制人胆管癌细胞株QBC939细胞集落的形成。电镜观察用半数抑制剂量的蜈蚣水提取物处理人QBC939胆管癌细胞48h后,可见明显的凋亡小体。 2.成功建立人胆管癌细胞株QBC939裸鼠移植瘤动物模型；与对照组相比,10 g/kg蜈蚣水提取物灌胃对裸鼠QBC939胆管癌皮下移植瘤具有抑制作用；H.E染色可见实验组肿瘤细胞可见空泡化及大量核固缩,而对照组少见。 3.蛋白质组学检测显示,对比QBC939皮下移植瘤细胞38个差异性蛋白。有27个下调,有11个上调, CK8、CK18及Bcl-2相关蛋白表达下调,Galectin-1和Galectin-7表达上调。 4.RT-PCR及Western blot检测实验组的Bax上调而Bcl-2下调。 结论： 1.蜈蚣水提取物有抑制胆管癌QBC939细胞生长的作用,随着蜈蚣水提取物浓度逐渐增加,抑瘤作用递增,其48小时IC50值为12.5mg/ml。 2：成功建立人胆管癌细胞株QBC939裸鼠移植瘤动物模型,10g/kg蜈蚣水提取物对裸鼠QBC939胆管癌皮下移植瘤具有抑制作用。 3：蜈蚣水提取物的治疗引起胆管癌QBC939皮下移植瘤细胞蛋白质组学的38个差异。CK8、CK18及Bcl-2相关蛋白表达下调,Galectin-1和Galectin-7表达上调。 4：蜈蚣水提取物对胆管癌QBC939的抑制作用,可能是通过上调Bax及下调Bcl-2途径引起胆管癌细胞的凋亡来实现的。