雌激素及其相关炎症因子对卵泡发育的影响

雌激素在卵泡发育过程中发挥着重要作用,本课题旨在研究在卵泡发育过程中雌激素与炎症因子之间的相互作用及关系,及其对于临床辅助生殖结局和离体颗粒细胞增殖的影响。 第一部分：临床ART(Assisted reproductive technique, ART)妇女卵泡发育环境中炎症因子及激素水平对于临床妊娠结局的影响 目的：临床辅助生殖技术已经被广泛的应用于内异症相关性不孕的治疗,但是治疗效果却受到内异症的影响。我们研究的目的在于评价内异症患者卵泡液中炎症相关因子白细胞介素1-β(Interleukin-1beta, IL-1β)、前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2)、前列腺素F2-α(Prostaglandin F2-alpha, PGF2-α)和转化生长因子(Transforming growth factors-beta2, TGF-β2)的含量及激素水平对卵泡发育和患者ART妊娠结局的影响及其预测价值. 方法：将在仁济医院进行临床辅助生殖技术治疗,并在超促排卵过程中的子宫内膜异位症相关性不孕(endometriosis-associated infertility)患者29例和对照组患者36例选入本病例对照实验,利用酶联免疫吸附及化学发光方法检测取卵日卵泡液中IL-1β、PGE2、PGF2-α和TGFβ2的水平和激素水平,并用realtimePCR方法检测在卵泡液中散落的颗粒细胞中IL-1β、ptgs-2(Prostaglandin endoperoxide synthase2, ptgs2)、CYP19A1及PPARy (Peroxisome proliferator-activated receptor gamma)的表达情况,并利用SPSS软件分析其与ART妊娠结局的关系。 结果：子宫内膜异位症患者的取卵数目、MII卵率、卵裂率、有效胚胎率及ART妊娠率均显著低于对照组,取卵前两日的血清E2水平与取卵数目成正相关,并且显著低于对照组。内异症患者的卵巢颗粒细胞芳香化酶表达量低于对照组。但是内异症患者卵泡液中PGE2水平显著高于对照组,且卵泡液中PGE2、PGF2-α、IL-1β及TGF-β2含量存在相关性,内异症与患者的内分泌水平及妊娠率成负相关。 结论：临床辅助生殖结局与取卵前两日的E2水平相关,并受到内异症的影响。并且,在内异症患者卵泡液中激素和炎症因子水平PGE2的含量可能影响妊娠结局。卵泡液中PGE2的含量过高或过低都会对ART患者的妊娠结局产生影响,其中,参与子宫内膜异位症发病过程的炎症因子及雌激素可能共同作用影响患者卵母细胞质量和数量,进而导致内异症相关不孕患者的ART的妊娠率降低。 第二部分：长方案治疗PCOS相关性不孕的疗效及激素水平和卵泡液中炎症因子对人工辅助生殖结局的影响 目的：研究卵泡液中炎症因子IL-1β, PGE2, PGF2-α和TGF-β2及激素水平对超促排卵长方案治疗多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)患者的人工辅助生殖结局的影响。 方法：将在仁济医院生殖中心进行人工辅助生殖长方案促排卵治疗的对照组患者16例与PCOS患者17例纳入本研究。利用ELISA方法测定卵泡液中IL-1β, PGE2, PGF2-α和TGF-β2的浓度,利用Realtime PCR测定颗粒细胞中IL1β, Ptgs2, aromatase和PPARy表达量,并且随访辅助生殖治疗的结局。 结果：进行长方案超促排卵的PCOS患者与对照组患者比较,取卵数目及妊娠结局之间没有统计学差异,而PCOS患者卵泡液中IL-1β, PGE2和TGF-β2的浓度显著高于对照组。 结论：卵泡液中炎症因子水平提高,可能反映了PCOS的炎症性病理过程,但是不影响PCOS患者的ART结局。 第三部分：雌激素对小鼠离体颗粒细胞中炎症因子表达的影响 目的：在离体培养的小鼠颗粒细胞中添加雌激素,观察雌激素对于颗粒细胞增殖的影响,检测雌激素对于颗粒细胞增殖过程中IL-1β, TGF-β2等因子的作用。 材料与方法：取4周龄未成熟小鼠卵巢颗粒细胞离体培养,颗粒细胞贴壁后,实验组添加DMSO溶解的雌激素溶液(estradiol100ng/μl)1μl,对照组添加相同剂量的DMSO,培养48小时后分别检测IL-1β、TGF-β2mRNA的表达量。 结果：离体培养的颗粒细胞在贴壁后促卵泡激素受体(follicle stimulating hormone receptor, FSHR)、黄体生成素受体(luteinizing hormone receptor, LHR)、雌激素受体a(estrogen receptor alpha, ERa)、雌激素受体β (estrogen receptor beta, ERβ)均表达,其中促卵泡激素受体在颗粒细胞贴壁24小时后表达量下降。离体添加雌激素培养颗粒细胞24小时,实验组细胞的增殖数量与对照组比较均未见显著差异,且IL-1β、TGF-β2mRNA的表达量下降。 结论：离体培养的颗粒细胞在失去促卵泡激素刺激后,FSHR在mRNA水平表达降低。100ng/ml浓度的雌激素对离体培养的颗粒细胞增殖没有显著的促进作用。并且抑制在颗粒细胞中IL-1β、TGF-β2的表达。