补肾化痰方对绝经后骨质疏松症模型大鼠骨吸收的影响

目的： 从理论角度分析总结绝经后骨质疏松症的病因病机,并通过实验研究观察去卵巢骨质疏松大鼠骨密度和骨代谢相关指标(血生化指标、细胞因子等)的变化,从调节大鼠骨代谢的角度探讨补肾化痰方对PMOP的治疗作用及作用机制,为方药的临床应用提供科学依据。 方法： 1理论研究 系统回顾古今文献,了解中医理论对PMOP的病因病机、治则治法的认识,为实验研究提供了决策依据。 2实验研究 8月龄SD雌性大鼠切除双侧卵巢,建立绝经后骨质疏松症模型。实验动物机分为模型组、假手术组、西药组、中药中剂量组、中药高剂量组。术后3个月开始灌胃给药。中药中剂量组以补肾化痰方9.4g/kg·b·w灌胃,中药高剂量组以以补肾化痰方18.8g/kg·b·w灌胃,西药组予以利维爱0.23 mg/kg·b·w,正常对照组、假手术组以等体积的生理盐水灌胃。每天一次,给药时间为8周。补肾化痰方由菟丝子30g、淫羊藿10g、补骨脂15g、全瓜蒌15g、红曲12g,山楂20g六味中药组成。 灌胃结束后,麻醉处死大鼠,取大鼠左后肢股骨,双能X线骨密度仪测定大鼠离体股骨的骨密度；摘除双侧眼球取血离心,取血清,ELISA法检测各组大鼠血清中ADP、TRACP5b和β-CTX的含量；免疫组化法检测大鼠胫骨TNF-α和IL-6水平；取大鼠股骨骨髓细胞提取总RNA,RT-PCR检测PPARγ2 mRNA表达。 统计学处理：采用SPSS 13.0统计软件进行方差分析,所有数据均以均数±标准差(x±s)表示,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果： 1理论研究 回顾古今研究PMOP的相关文献,对PMOP的病因病机、治则治法的认识均认为肾虚为发病的关键。但在其他致病因素方面,认识尚不统一。本课题提出“脂代谢异常可能与PMOP痰浊有关”的假说,并据此制定治疗PMOP的新治法——补肾化痰法；所选补肾化痰方为导师向楠教授临床经验方,在临床和动物实验中都已初步证实,补肾化痰方对PMOP有较好的治疗效果。 2实验研究 与假手术组大鼠相比,去卵巢骨质疏松症模型组大鼠股骨骨密度明显降低。西药利维爱和补肾化痰方均能有效提高去卵巢骨质疏松症大鼠的骨密度,与模型组相比,差异有显著意义。高剂量组与西药组骨密度值差异无显著意义。 与假手术组大鼠相比,去卵巢骨质疏松症模型组大鼠血清生化指标ADP、TRACP5b和β-CTX水平明显升高。西药利维爱和补肾化痰方的中、高剂量组都能显著降低OVX大鼠血清ADP、TRACP5b和β-CTX水平(与模型组相比,P<0.05)。补肾化痰方高剂量组降低血清生化指标水平的作用强于中剂量组,两组间ADP和TRACP5b水平差异无统计学意义,β-CTX水平差异有显著性意义(P<0.01)。中药高剂量组各生化指标水平与西药组差异无显著意义。 与假手术组大鼠相比,去卵巢骨质疏松症模型组大鼠骨组织HE染色可见骨髓腔扩大,骨小梁变细,见断裂现象,且占视野面积降低,数目明显减少,分布稀疏,骨小梁之间间隙增宽,排列不整齐。西药组和补肾化痰方高剂量组骨髓腔较小,骨小梁数量多,断裂较少,排列整齐,各骨小梁之间间隙较小；中药中剂量组骨髓腔较大,骨小梁变细,骨小梁可见明显断裂,排列稍显紊乱,但优于模型组。 免疫组织化学观察可见TNF-α和IL-6在骨组织中的阳性表达主要分布于骨小梁周边破骨细胞、成骨细胞和骨髓基质细胞胞浆中,光镜下观察,呈棕黄色颗粒。与假手术组大鼠相比,去卵巢骨质疏松症模型组大鼠骨组织中阳性细胞数明显多于假手术组,补肾化痰方中、高剂量组和西药组阳性细胞数明显少于模型组。与假手术组大鼠相比,去卵巢骨质疏松症模型组大鼠骨组织TNF-α和IL-6表达明显升高。利维爱和补肾化痰方都能降低骨组织TNF-α和IL-6水平。补肾化痰方高剂量组降低骨组织TNF-α和IL-6水平的作用强于中剂量组,但差异无统计学意义。 与假手术组大鼠相比,去卵巢骨质疏松症模型组大鼠骨髓骨髓细胞PPARγ2 mRNA表达明显升高。利维爱和补肾化痰方都能降低骨髓细胞PPARγ2 mRNA表达。补肾化痰方高剂量组降低骨髓细胞PPARγ2 mRNA表达的作用强于中剂量组,但差异无统计学意义。 结论： 在中医理论指导下,应用补肾化痰方治疗绝经后骨质疏松症有理论基础,也有实验研究支持。去卵巢大鼠明显出现骨吸收活动增强和脂代谢异常。实验研究所用补肾化痰方能增加去卵巢大鼠骨密度,降低血清骨吸收相关生化指标水平、降低骨组织骨吸收相关细胞因子及骨髓PPARγ2 mRNA表达,对大鼠去卵巢骨质疏松症有较好的治疗作用。其作用机制可能是多途径、多靶点促进骨形成,抑制骨吸收。