中药材及其复方DNA遗传标记鉴定方法研究

DNA遗传标记鉴定方法是在中药四大鉴定方法及分子生物学发展的基础上衍生出来的一种新的鉴定法。本文围绕5种节肢动物及其复方小儿抽风散的DNA遗传标记鉴定，主要进行了5个有关方面的研究，即：商品药材总DNA的提取；5种动物药18SrRNA基因片段的序列研究；5种药材的特异性引物PCR鉴定；5种药材的基因酶切鉴定；5种药材在复方中的特异性鉴定。得出以下结论： (1)通过对药材中总DNA的提取研究，得到了一种能有效地从动物药材中提取出纯度较高的总DNA的方法。 (2)对5种动物药18S rRNA基因片段序列分析表明，5种动物间亲缘关系较近，从得到的序列可以设计5种动物的特异性引物。 (3)特异性引物PCR鉴定法表明：在合成的5对引物都能分别特异地将5种药材区别出来，达到了特异性鉴别的目的。 (4)通过对5种药材的EcoRⅡ酶切鉴定，证明基因酶切法可以用于中药材的品种鉴定，具有专属性。 (5)特异性引物鉴定法能够鉴定含部分或微量原中药的中药制剂，本方法具有准确性、科学性、可信度高等特点。 本文应用分子生物学原理，研究中药材及其复方基因鉴定的关键技术和方法，通过确立部分节肢类动物药的专属性基因鉴定的评价指标来控制中药品种和质量，并首次将基因鉴定方法引入中药复方的鉴别。