通脉大生片对大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β1/smads通路影响的研究

目的：在前期动物实验研究的基础上,本实验以体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞为载体,研究通脉大生片对大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β/Smads信号传导通路的影响,证实通脉大生片是作用于该通路,促进卵泡的发育,而达到治疗排卵障碍性不孕的目的,进一步明确通脉大生片的作用机制,从而为补肾中药的新药研究奠定实验研究基础。 方法：将体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞常规培养于含青霉素(100IU/L)和链霉素(100μg/L)的DMEM/F12培养基中,培养基中加入10%胎牛血清,置于37℃、5%C02培养箱中培养。随机分为五组：正常组、通脉大生片高剂量组(简称通高组)、通脉大生片中剂量组(简称通中组)、通脉大生片低剂量组(简称通低组)、FSH组,分别于细胞生长对数期给予相应的药物干预,取给药后1h、2h、6h、12h、24h、48h细胞培养上清液,用酶联免疫法(ELISA法)检测用药后不同组别、不同时间点的转化生长因子β1及其受体(TGF-β1、TGF-β1R)的表达量；正常组与通脉大生片各剂量组分别取给药后6h、12h、24h的大鼠卵巢颗粒细胞爬片,FSH组取给药后1h、2h、6h的大鼠卵巢颗粒细胞爬片,用甲醛固定后,应用免疫细胞化学技术SP法检测其Smad3、Smad、Smad7的表达量,运用SPSS13.0软件分析数据。 结果： 1、正常组各时间点的TGF-β1、TGF-β1R表达量无明显改变；通脉大生片各剂量组的TGF-β1、TGF-β1R表达量均于给药后12h达高峰,且以通中组最高(P<0.05),之后开始下降,48h时降到最低；FSH组TGF-β1、TGF-β1R表达量于给药后2h达高峰,之后开始下降,48h时降到最低。通中组峰值与FSH组峰值比较无明显差异(P>0.05),无统计学意义。 2、正常组各时间点Smad3的核阳性率无明显变化,通脉大生片各剂量组Smad3的核阳性率于给药后12h的核阳性率最高,且以通中组最高(P<0.05),FSH组Smad3的核阳性率于给药后2h的表达量最高。通中组Smad3的核阳性率峰值与FSH组比较无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。 ‘3、正常组各时间点Smad4的核阳性率无明显变化,通脉大生片各剂量组Smad4的核阳性率于给药后12h的表达量最高,且以通中组最高(P<0.05),FSH组Smad4的核阳性率于给药后2h的表达量最高。通中组Smad3的核阳性率峰值与FSH组比较无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。 4、正常组各时间点Smad7的核阳性率无明显变化,通脉大生片各剂量组Smad3的核阳性率于给药后12h的阳性率最低,随后一直保持最低水平,且以通高组最低(P<0.05),FSH组Smad7的核阳性率于给药后2h的表达量最低,之后一直保持低水平。FSH组的Smad7核阳性率最低值低于通中组,,有统计学意义(P<0.05)。 结论： 1、通脉大生片可增加大鼠卵巢颗粒细胞的TGF-β1、TGF-β1R的表达量, 2、通脉大生片可上调大鼠卵巢颗粒细胞Smad3、Smad4的表达,下调Smad7的表达。 3、smad3、smad4、smad7的表达对TGF-β1的表达量呈浓度依赖性。