从PTEN信号通路探讨淫羊藿苷促神经干细胞增殖分化的作用机制

目的：在脑肾相关的理论基础与大鼠海马区神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)体外分离与培养的实验基础上,研究补肾中药淫羊藿的主要单体成分(淫羊藿苷)对 NSCs增殖与分化的影响,通过检测PTEN、P-S6R等相关蛋白的表达,初步探讨淫羊藿苷促神经干细胞增殖分化的机制,为运用淫羊藿苷诱导NSCs体外分化的研究提供实验基础,更为补肾中药联合干细胞技术治疗中枢神经系统疾病提供崭新方向。方法：1.将新生的SD (Sprague-Dawley)乳大鼠颈椎脱臼处死后,无菌条件下分离两侧海马,获取该部神经组织,经机械分离、体外特定培养基进行原代、传代培养,将培养出的神经球进行细胞免疫荧光化学法检测巢蛋白(Nestin)的表达情况,验证其是神经干细胞。2.取培养的第2代神经干细胞,传代后随即分成5组,即淫羊藿苷1000ng/ml、100 ng/ml、10 ng/ml,DMSO组,Control组,分别采用’CKK-8检测法观察淫羊藿苷对五组神经干细胞的增殖的影响；应用Western blot (WB)观察淫羊藿苷(Icariin,ICA)对PTEN信号通路的表达、测定反映雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性的磷酸化核糖体(P-S6R)蛋白及tubulin蛋白的表达情况。结果：(1)细胞免疫荧光化学法检测Nestin:结果提示Nest in呈阳性表达,证实实验培养出的细胞球是具有自我更新能力的神经干细胞。(2)CKK-8法对细胞增殖实验结果显示：ICA组的吸光度值明显高于DMSO组、Control组(P<0.05),且以ICA浓度为1000ng/ml吸收值最高(P<0.05)。(3)Western blot测定结果表明：与DMSO组、Control组对比,淫羊藿苷组可以显著抑制SD乳大鼠海马区的PTEN蛋白的表达水平,同时使P-S6R蛋白及tubulin蛋白表达水平显著上调(P<0.05),且同一药物作用于不同细胞时,淫羊藿苷浓度为1000ng/ml组表达最为显著(P<0.05)结论：淫羊藿苷具有促进外源性神经干细胞增殖、分化为神经元的能力,其机制可能是是通过抑制PTEN的表达,上调P-S6R的表达来实现神经元的再生的。