椪柑多倍体的分离以及脐橙品种的遗传多样性分析

被引：0

作者：

洪柳

机构：

[1] 华中农业大学

关键词：

椪柑(Citrus reticulata); 四倍体; 流式细胞仪; 脐橙(C.sinensis); DNA甲基化; SSR; MSAP;

D O I：

暂无

年度学位：

2006

学位类型：

博士

导师：

邓秀新;

摘要：

体细胞突变是柑橘等果树比较常见的生物学现象，也是品种选育，即芽变选种的主要变异来源。针对柑橘芽变品种较多，识别比较困难，遗传标记差异小等困难，本文采用MSAP(甲基化敏感扩增多态性)等标记技术，对世界主要的甜橙类型脐橙(Citrus sinensis)不同品种进行分析，研究其遗传多样性；同时，利用体细胞的倍性变异以及柑橘具有珠心胚现象的特点，针对椪柑种子多的问题，从椪柑种子离体播种实生苗中分离得到四倍体，为培育三倍体无核类型，改良种子多的性状提供了材料。主要结：果如下： 1、通过组培方法培育椪柑(C. reticulata)多胚苗，从374粒种子中培养得到449株小苗，利用流式细胞仪和染色体记数方法筛选出7株四倍体植株。对获得的7株四倍体植株进行SSR分析，表明这7株四倍体均来自珠心细胞，为体细胞自然加倍得到的同源四倍体。这些同源四倍体植株表现出叶片比二倍体大，叶片鲜样的叶绿素a和类胡萝卜素含量则比二倍体低。结合RAPD、SSR、AFLP分析研究椪柑体细胞加倍发生的变异情况，RAPD、SSR分析没有检测到变异的发生，说明加倍过程很少发生重组。AFLP检测到其中一株四倍体有一条特征带，这可能是椪柑体细胞发生加倍时，核苷酸碱基序列发生改变，或是同源四倍体的等位基因发生漂移。 2、应用RAPD、SSR、AFLP、SRAP、IRAP分子标记研究脐橙24个品种的多态性，RAPD、SSR、IRAP均没有鉴别出脐橙品种之间的遗传差异；AFLP的检测效率也很低，130对引物中仅5对显示品种间的多态性，鉴别出了四个脐橙品种；而36对SRAP引物中也只有一对显示朋娜有一条带缺失。 3、8个Mse Ⅰ／Pst Ⅰ(M／P)引物对和8个EcoR Ⅰ／Hpa Ⅱ、EcoR Ⅰ／Msp Ⅰ(E／H+M)引物对分别得到36个和43个多态性标记，M／P引物对和E／H+M引物对得出的平均多态性比率(Pi)为7.56％和15.19％，平均多态性信息含量分别为0.086和0.249，标记指数分别为0.387和1.070。E／H+M引物对的效率高于M／P引物对的效率。130个EcoR Ⅰ／Mse Ⅰ(E／M)引物对，有5对引物显示有多态性。这5对引物扩增得到318条带，其中有11条多态带，平均多态率为3.46％，平均多态性信息含量(PIC)和标记指数(MI)分别为0.085和0.187，比E／H+M和M／P的都要低，表明E／M引物对的效率比E／H+M和M／P引物对的效率要低很多。 4、利用MSAP(甲基化敏感扩增多态性)技术对24个脐橙品种胞嘧啶甲基化模式和程度进行评估，结果发现DNA甲基化在脐橙中发生频繁，在脐橙基因组CCGG

引用

页数：87

共 133 条

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