逍遥散抗抑郁有效部位的PK-PD结合研究

选题依据：抑郁症为一种常见的精神疾病,预测其到2020年将要成为世界第二大致残性疾病,受到众多医药工作者的重视。因现有的西药具有复发率高和副作用大等问题,从中药中研发理想的抗抑郁药就成为研究热点。逍遥散作为传统的抗抑郁名方成为众多研究者的首选,但其抗抑郁物质基础、药物在体内代谢特征及作用机理均不明确。本课题组前期研究已经明确了逍遥散中石油醚部位为其抗抑郁活性的有效部位,但是此部位进入生物体内后有哪些化学成分在起治疗作用、它们之间是否有协调作用、又是怎样协调发挥作用来改善机体的状态、药物的作用机制及其体内动态变化规律等问题都不清楚,所以对逍遥散石油醚部位进行药代动力学的研究成为必不可少的研究内容。目的：筛选逍遥散石油醚部位中抗抑郁活性指标成分,并考察其药代动力学特征、配伍规律、辨证药代动力学及其药动学-药效学相关性进行研究。为逍遥散有效部位的临床应用、新抗抑郁中药新药的开发提供合理的科学依据。方法：建立血清药物化学方法,结合体外单胺再摄取抑制实验,筛选逍遥散石油醚部位抗抑郁的指标成分；建立生物样品中指标成分的UPLC-PDA测定方法,考察灌胃给予正常大鼠逍遥散石油醚部位后其药代动力学行为,及其在大鼠体内的组织分布及排泄情况；分别建立血清中源自柴胡、当归的指标成分测定方法,并考察灌胃给予健康大鼠单味石油醚部位的药代动力学,探讨配伍对指标成分的影响；对整合药动动力学这一新概念进行了初步的探索。并对灌胃给予病理状态大鼠逍遥散石油醚部位后的药动学特征及其药动学-药效学进行相关性研究。结果：1.利用血清药物化学结合体外单胺在摄取抑制实验结果,发现5种抗抑郁的指标成分,分别为藁本内酯、(2Z,8Z,10E)-十五烷三烯-4,6-二炔-1-醇(RB-1)、(2Z,8E,10E)-十五烷三烯-4,6-二二炔-1-醇(RB-2)、(2Z,8Z,10E)-十七烷三烯-4,6-二炔-1-醇(RB-3)、和柴胡炔醇(RB-4)。2.建立了同时测定血清中藁本内酯、RB-1-4的测定方法,并进行了严格的方法学考察,结果显示该方法灵敏、稳定、准确、可靠,可用于其药代动力学研究、组织分布和排泄研究。大鼠灌胃给予逍遥散石油醚部位后,结果发现在血清中可定量检测到藁本内酯、RB-2、RB-4及两个多炔类代谢物M1、M2。血药浓度-时间曲线显示其均具有双峰现象。藁本内酯其吸收消除均很快,体内滞留时间较短。RB-2和RB-4在体内的吸收较快,消除较慢,体内滞留时间较长。代谢物在体内的吸收和消除都较快。与灌胃给予单味药石油醚部位相比,配伍有利于藁本内酯的吸收,而抑制RB-2和RB-4的吸收。3.对藁本内酯、RB-2和RB-4的组织分布及排泄进行研究,发现藁本内酯在大鼠体内分布广泛,在组织中的停留时间较短。RB-2和RB-4在组织中分布广泛,且蓄积时间较长。其排泄研究发现藁本内酯RB-2和RB-4原形在尿和粪中的累积排泄量不足给药量的5%,推测其在大鼠体内主要以代谢物的形式排出体外。4.对抑郁模型大鼠的药动学研究发现,在病理状态下,大鼠的吸收较正常组差异较大,模型组的吸收较慢,藁本内酯在血清中可以检测,但低于定量限,RB-2和RB-4的AUC值较正常组明显增加。整合药动动力学显示RB-2为药效最大贡献成分。药效学结果显示逍遥散对抑郁状态下大鼠有一定的治疗作用,但对正常大鼠组药效指标几乎无影响。成功地拟合了PK-PD模型,血药浓度和效应间符合Emax模型,效应-血药浓度曲线为顺时针“滞后环”。结论：1.通过本研究发现藁本内酯、RB-1、RB-2、RB-3、RB-4可能为逍遥散石油醚部位的抗抑郁有效成分,是其抗抑郁作用的物质基础。2.药代动力学和组织分布排泄研究表明其药代动力学参数适宜,推测其可以作为潜在抗抑郁药物进行进一步的研究。3.与单味药的药动学研究比较发现,配伍使用可以使复方中有效成分的吸收减少,与中药药对理论中收敛作用一致,为复方配伍规律研究提供科学依据。4.药动学-药效学相关研究发现药效存在滞后性,且有效成分在模型组大鼠中具有治疗作用,但对正常生理组大鼠几乎无作用,此与“有故无殒”思想一致,为逍遥散临床前安全性和有效性评价提供药代动力学依据。