三七紫外指纹图谱研究

三七[Panax notoginseng (Burk) F. H Chen]为五加科人参属的重要药用植物，主要以干燥根入药，具有散淤止血，消肿定痛的功效。其主要成分有三七总皂苷，目前，已从三七不同部位中分离出60多种单体皂苷类成分，其中大部分为达玛烷型四环三萜皂苷。三七总皂苷具有止血活血、补血、镇痛镇静、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等多种药理活性，主要用于治疗心脑血管系统、血液系统、免疫系统疾病等。紫外指纹图谱法分别采用多种不同极性溶剂对药材中不同极性区间的成分进行提取，从整体上更为细致的反映药材的成分信息，可以用于中药材的品种鉴别及同种药材的质量评价。皂苷类成分的紫外吸收较弱，使得紫外光谱技术在三七质量评价中的应用具有一定的局限性；另一方面，皂苷类成分与某些特定的显色剂会有显色反应，从而增强皂苷类成分的紫外吸收，这一方法已广泛应用在皂苷类成分的定量分析中。显色剂显色结合紫外光谱法分析三七紫外指纹图谱，在全面反映三七化学成分信息的同时，强调了三七中皂苷类成分的紫外特征，符合中药指纹图谱完整性和特征性的要求。 本研究采用氯仿、乙醇和水对三七中不同极性区间的成分进行分步提取，利用紫外光谱仪构建三七紫外指纹图谱，对三七的指纹图谱进行系统研究。主要研究结果如下： 1）三七不同溶剂提取液的紫外吸收主要在190-250nm的波长范围。双指标序列分析法、聚类分析法和主成分分析法的结果与图谱直观分析结果一致，三七紫外指纹图谱的相似性较小，变异性较大；三七样品因生长年限和产地的不同，其紫外指纹图谱有较大的差异性。 2）采用氯仿、乙醇和水对三七样品进行提取，分别在三种提取液中加入一定量5%硫酸香草醛、10%硫酸、1%氯化铝、5%磷酸香草醛、5%冰乙酸香草醛、5%冰乙酸香草醛+高氯酸（1:4），构建不同溶剂及显色剂条件下三七紫外指纹图谱。结果显示，不同显色剂条件下，三七紫外指纹图谱重现性、精密度和稳定性良好，RSD值均小于1%；指纹图谱直观对比、方差分析和聚类分析结果表明，加入10%硫酸和1%氯化铝对三七紫外指纹图谱没有显著影响；加入5%硫酸香草醛、5%磷酸香草醛、5%冰乙酸香草醛和5%冰乙酸香草醛+高氯酸（1:4）4种显色剂对三七的紫外指纹图谱具有显著影响，吸收峰数目明显增多，吸收波长范围变宽。 3）采用双指标序列、系统聚类、主成分分析、PLS-MD分析等四种方法对5%硫酸香草醛、5%磷酸香草醛和5%冰乙酸香草醛三种显色剂显色，结果显示三七样品的共有峰率数据分布较为集中，主要分布在50%-70%范围之间。PLS-MD分析表明，不同产地和生长年限的三七样品紫外指纹图谱有差异，依据产地和生长年限可对三七样品进行分类。不同显色剂显色后其分类结果有差异，硫酸香草醛显色后，三七样品按产地分为云南文山、云南其他产区和广西靖西三类；磷酸香草醛显色后，云南红河所产三七与其他产地三七存在较大差异；冰乙酸香草醛显色后，不同产地之间有交叉，样品的分类特征不明显。通过主成分分析可以明确区分不同产地和不同生长年限的三七样品。 4）采用冰乙酸香草醛-紫外指纹图谱法对三七不同药用部位（须根、主根、根茎、茎、叶和种子）的紫外指纹图谱进行研究，共有峰率和变异峰率双指标序列分析法、主成分分析法和聚类分析法三种分析表明，根茎与须根，茎与叶均有较大的化学相似性，种子和主根与其他部位均有较大差异。