Cobratoxin镇痛及其机制的研究

目的:本实验旨在研究泰国眼镜蛇长链神经毒素cobratoxin的镇痛作用及其机制。 方法:用热板法、von Frey法、福尔马林法、醋酸扭体法等行为学方法研究鞘内注射泰国眼镜蛇长链神经毒素cobratoxin对小鼠急性痛的镇痛作用。建立大鼠坐骨神经部分结扎(PSNL)的神经病理性疼痛模型,采用压爪-缩腿法和辐射热-缩腿法测定动物的机械痛阈和热痛阈;观察鞘内注射cobratoxin后PSNL大鼠痛觉过敏的变化;运用免疫组织化学,检测PSNL大鼠脊髓背角c-fos表达,计数Fos免疫反应阳性细胞;用药理学方法观察M4亚型毒蕈碱型胆碱受体(mAChR)拮抗剂托吡卡胺(tropicamide)和α7烟碱型胆碱受体(nAChR)拮抗剂甲基牛扁亭碱(methyllycaconitine,MLA)是否能翻转cobratoxin的镇痛作用,以探讨其相关机制。 结果:(1)鞘内注射cobratoxin(5μg/kg)对小鼠由热、机械和化学刺激引起的多种急性痛都具有镇痛作用;而且,这种镇痛可以被静脉注射M4受体拮抗剂托吡卡胺所阻断。(2)PSNL大鼠术后第7天痛阈明显降低,出现机械痛敏和热痛敏;脊髓背角c-fos表达明显上调(P<0.01),神经元处于激活状态。(3)PSNL大鼠鞘内注射不同剂量的cobratoxin(0.56μg/kg,1.12μg/kg,,4.5μg/kg)对机械痛敏具有剂量依赖性的抑制作用,脊髓背角c-fos表达也明显减少(P<0.001)。(4)PSNL大鼠鞘内注射M4受体拮抗剂托吡卡胺或者α7-N受体拮抗剂MLA均可明显翻转cobratoxin的镇痛作用和脊髓背角c-fos的表达。 结论:cobratoxin对急、慢性痛具有镇痛作用;其镇痛机制涉及胆碱能系统的两大类受体(mAChR和nAChR),尤其是M4和α7亚型受体介导了cobratoxin的镇痛作用。