贮藏期片烟霉变菌的分子鉴定及新型防霉剂的筛选

烟草业是我国极为重要的国税收入行业。随着我国烟草产业的迅速发展,烟叶贮藏的规模和数量越来越大,贮藏时间也相应延长。长期以来,由于贮藏设施落后,管理粗放,导致烟叶在贮藏期间常常遭受多种霉菌的侵害而发生霉变,深入探索烟草贮存期由真菌引起的霉变以及防霉问题已是当务之急。在我国,烟叶霉变的研究比较滞后,引起烟叶霉变的霉菌种类仅有少数报导且现有防霉剂防霉效果不佳或是对人体有副作用,因此建立一套原烟霉菌快速检验检测的技术以及寻找一种用量少、安全性高、防霉效果好的防霉剂,具有重要的指导意义。 本研究对常德卷烟厂提供的100多个霉变烟叶样品,进行病原菌的分离、纯化、保存,获得5种病原真菌的纯培养,通过病原菌的显微镜检鉴定,观察霉菌形态特征、测定孢子大小,初步鉴定3个属。为进一步鉴定到种,提取了真菌DNA,对18S rDNA的ITs进行PCR扩增并克隆产物,测定序列后,通过BLAST搜索比对,确定五种病原菌为镰刀菌(Fusarium sp.)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、土生曲霉(Aspergillus terreus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、桔青霉(Penicilliumcitrinum)。在药剂筛选试验中,选用75%达科宁(Dacotech 40SC)、40%核星(Dimethachlon)、10%世高(Difenoconazole)、98%康茁灵(Kangzhuoling)、100%富马酸二甲酯(Dimethyl fumarate)等药剂测试对烟草霉菌的抑制效果。通过室内生物测定,40%核星的抑菌谱和抑菌效果最好,在浓度为130.32mg/kg时,对5种霉变微生物的抑制率均达95%以上,富马酸二甲酯的抑菌谱和抑菌效果为第二,在浓度为490mg/kg时,对5种霉变菌的抑制率均达95%以上。康茁灵是一种新型中药型药剂,对霉菌的抑制作用好,在稀释浓度为490mg/kg时,对5种霉变菌的抑制率均达95%以上,且副作用较小,是一种低毒安全高效的生物防霉剂。