慢性应激抑郁模型大鼠下丘脑突触相关蛋白表达改变及五乙酰栀子苷的抗抑郁作用研究

随着生活节奏的加快,在面对不同类型的压力下,越来越多的人受到抑郁症的困扰。抑郁症发生机制的假说目前主要有单胺递质假说、受体假说、神经内分泌假说和神经可塑性假说等,这些假说涉及一个共同的通路——下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴。在众多假说中神经可塑性假说的出现解释了其他一些假说中存在的争议。近年来随着影像学技术的发展,越来越多的证据表明抑郁症与神经可塑性变化密切相关,阻止神经可塑性变化也成为目前抗抑郁治疗最主要的方向之一。抗抑郁药物,特别是第三、四代抗抑郁药,有着更高的缓解治疗率和更佳的耐受性,但治愈率仍在30%左右。更多的抗抑郁药物研究者将眼光投向中药。目前已有大量研究表明一些中药通过影响HPA轴达到较好的抗抑郁作用,部分与西药联用具有增效作用。这为抗抑郁药物的研究提供了一个全新的方向。本课题的主要研究内容包括以下两个方面:第一部分慢性应激抑郁模型大鼠下丘脑突触相关蛋白表达改变及其病理意义目的:观察慢性应激抑郁模型大鼠下丘脑谷氨酸AMPA受体和突触相关蛋白表达改变及病理意义。方法:连续3周慢性不可预见性温和应激(CUMS)制备大鼠抑郁模型,测量动物行为学改变(糖水偏爱和旷场实验),Elisa检测血清皮质酮(CORT)水平,免疫组化法检测下丘脑室旁核(PVN)CRH及Glu R1蛋白表达,免疫荧光双标观察CRH与Glu R1在PVN CRH神经元的共表达情况,QPCR和WB检测下丘脑组织中Glu R1和突触相关蛋白(PSD95,SYP和MAP2)m RNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,CUMS大鼠存在明显行为学异常(糖水消耗量下降、穿格数和直立数减少)和血清CORT升高,表明CUMS抑郁模型制备成功;免疫组化结果表明CUMS大鼠PVN CRH及Glu R1蛋白表达升高,免疫荧光双标结果表明CRH与Glu R1在PVN神经元存在共表达现象,提示Glu R1定位于CRH神经元细胞膜上;CUMS大鼠下丘脑组织中Glu R1和突触相关蛋白(PSD95,SYP和MAP2)的m RNA及蛋白表达均明显上调,下丘脑Glu R1、PSD95、SYP和MAP2的蛋白水平与大鼠糖水偏爱率和总穿格数存在负相关。结论:CUMS大鼠下丘脑中谷氨酸能系统和突触系统明显失调,导致下丘脑室旁核中CRH神经元过度激活,并与大鼠抑郁样行为密切相关。第二部分五乙酰栀子苷对慢性应激抑郁模型大鼠抑郁样行为的影响及机制研究目的:观察五乙酰栀子苷对对慢性应激抑郁模型大鼠抑郁样行为的影响及机制研究。方法:60只大鼠随机分为正常组、模型组、五乙酰栀子苷(25,50,100 mg/kg)和氟西汀组(10 mg/kg)。除正常组外,均采用慢性轻度不可预见性应激(CUMS)制备大鼠抑郁模型。从造模第8天开始,五乙酰栀子苷和氟西汀连续灌胃给药2周。糖水偏爱实验、旷场实验及强迫游泳实验检测大鼠行为学,检测血清皮质酮(CORT)、肾上腺指数及下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)m RNA,WB检测下丘脑Glu R1,PSD95,SYP及MAP2蛋白表达水平。结果:与正常组相比,CUMS大鼠表现出异常行为学及HPA轴活化。五乙酰栀子苷能逆转CUMS诱导的大鼠行为学改变,包括提高糖水消耗量、增加穿格数和站立数、缩短不动时间及延长游泳时间;五乙酰栀子苷能使CUMS大鼠异常的HPA轴功能恢复,包括降低血清CORT和肾上腺指数、抑制下丘脑CRH m RNA表达。有意思的是,五乙酰栀子苷能不同程度地降低CUMS大鼠下丘脑Glu R1,PSD95,SYP及MAP2蛋白水平。结论:五乙酰栀子苷可以改善CUMS大鼠行为学,其抗抑郁作用可能与调节HPA轴功能、降低下丘脑Glu R1及突触相关蛋白表达等有关。