枸杞多糖防治大鼠酒精性脂肪肝的实验研究

随着饮酒人数及人均酒精消费量的增多,酒精对人体肝脏的损害日益成为一个全球性的问题。酒精性脂肪肝是最早、最常见的慢性肝损害之一,因其可逐渐发展为肝纤维化、肝硬化而危害极大。目前,酒精性肝损伤发病机制尚不完全明确,国内外亦无防治的理想药物,因此,从分子生物学角度研究其发病机制,寻找安全有效的中药防治AFL成为一重要课题。 乙醇通过诱导细胞色素P4502E1(CytochromeP4502E1,CYP2E1)表达及调控使反应性氧(reactive oxygen species, ROS)增多,进一步通过激活氧应激、增强脂质过氧化反应致肝损伤。枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharide, LBP)是宁夏枸杞的重要抗氧化成分,有报道在动物体内可清除氧自由基,抑制脂质过氧化反应,保护肝细胞。但对其防治酒精性肝损伤的分子机制研究尚不够深入,且缺乏在酒精持续作用下能否保护肝细胞免受损伤的研究。 目的 1.建立慢性酒精性脂肪肝(AFL)大鼠模型。 2.探讨乙醇导致AFL的机制。 3.探讨枸杞多糖(LBP)对AFL的防治效果。 4.研究LBP防治AFL的机制。 方法 1.用乙醇浓度递增,每日分两次灌胃10周建立大鼠慢性AFL模型。 2.取大鼠肝组织作病理切片,HE及苏丹Ⅲ染色,行病理学观察。 3.取大鼠血清测定肝功能酶谱:ALT、AST、γ-GT。 4.取大鼠肝组织制备肝匀浆,考马斯亮蓝测定匀浆蛋白含量,试剂盒测定肝组织中脂质过氧化酶(GSH-PX、SOD活力,MDA、GSH)及H2O2含量。 5.采用免疫组织化学染色法、RT-PCR法、Western Blot法测定大鼠肝组织中CYP2E1基因及蛋白表达。 6.采用超高速冷冻离心机提取大鼠肝微粒体,用Nash法测定CYP3A活性,RT-PCR法测定CYP3A基因表达。 结果与结论 1. Wistar大鼠用40%(V/V)乙醇8g/Kg.d灌胃至5周末,增加至50%(V/V)9g/Kg.d灌胃至10周末,可成功制备慢性AFL大鼠模型,且死亡率较低(约13%-17%),稳定性较好。 2.乙醇能明显升高ALT、AST、γ-GT,并通过诱导CYP2E1基因及蛋白表达,诱导CYP3A活性及基因表达,增强脂质过氧化反应,降低GSH-PX、SOD活力和GSH含量,增加MDA、H2O2含量,损害肝细胞,导致肝脏脂肪变性。 3. LBP通过抑制CYP2E1及CYP3A表达,减轻脂质过氧化反应,明显降低ALT、AST、γ-GT,恢复肝功能,提高GSH-PX、SOD活力和GSH含量,降低MDA、H2O2含量,逆转肝脏脂肪性病理变化,对AFL有良好的预防和治疗效果,安全有效,值得临床推广应用。