多酚脂质体的物化稳定性及生理活性研究

多酚化合物是植物次级代谢产物,具有广泛的生理活性如抗氧化、抗炎症、抗菌、抗癌和抗病毒等活性。多酚化合物在胃停留时间不足,肠道内的渗透率低或溶解度低,在加工储藏过程中对光、温度、氧气等环境因素的敏感性,胃肠道环境中的pH、酶及其它营养物的存在,这些因素都极大地限制了多酚化合物的生理活性。脂质体是一种由双亲性脂质壁材组成具有类细胞结构的微型囊泡,它可以同时包埋亲水性和疏水性物质。目前关于多酚脂质体的报道主要集中在多酚脂质体的制备工艺优化上,而关于多酚脂质体的稳定性和生理活性研究较少;多酚脂质体在消化过程中容易受到低酸环境、酶和胆盐等破坏,这严重地限制了多酚脂质体的应用。本论文拟解决以下三个问题:一是采用乙醇注入法结合微射流方法制备了亲水性多酚(茶多酚、EGCG)脂质体和疏水性多酚(丁香酚)纳米脂质体,并对多酚纳米脂质体物化特性、碱性pH稳定性和模拟胃肠道稳定性进行考察;二是对多酚纳米脂质体的生理活性(化学抗氧化活性、细胞抗氧化活性、细胞毒性、细胞摄取率以及体外抗菌活性)进行评估;三是为了进一步提高多酚脂质体在模拟体外消化过程中的稳定性,制备了抗消化的新型运载体系葡聚糖硫酸酯修饰的阳离子纳米脂质体和聚合电解质双层修饰的纳米脂质体。实验结果如下:1.采用乙醇注入结合动态高压微射流的方法制备茶多酚、EGCG和丁香酚纳米脂质体。茶多酚、EGCG和丁香酚纳米脂质体具有较小的平均粒径(66.8 nm、71.7 nm和58.6 nm)和低的分散系数(0.213、0.286和0.381)。纳米脂质体对茶多酚、EGCG和丁香酚具有很好的缓释特性。纳米脂质体包埋能够显著地提高茶多酚和EGCG在碱性pH环境或模拟胃肠道环境的稳定性。胆盐和胰液素的存在会显著地降低纳米脂质体对EGCG在模拟胃肠道环境的保护能力。丁香酚纳米脂质体在4°C和室温都具有很好的储藏稳定性,纳米脂质体包埋能够显著地提高丁香酚水溶性。2.茶多酚经纳米脂质体包埋之后具有相同或者略低的体外抗氧化活性。纳米脂质体包埋能够减缓EGCG抗氧化活性的衰减。纳米脂质体包埋显著地降低了茶多酚的体外抗菌活性(抑菌圈变小、最小抑菌浓度和杀菌浓度升高)。丁香酚经纳米脂质体包埋后其抑菌圈也显著地降低了,其在培养基和牛奶环境下的最小杀菌和抗菌浓度显著地提高了。EGCG经纳米脂质体包埋后,其细胞抗氧化活性、细胞摄取率和细胞毒性都显著地降低了。3.通过薄膜分散结合微射流方法制备的EGCG双亲性壳聚糖阳离子纳米脂质体具有平均粒径低、表面电荷高、包封率高和缓释能力强等优点,但是双亲性壳聚糖阳离子纳米脂质体与模拟肠液混合后会有沉淀产生,消化稳定性较低。双亲性壳聚糖阳离子纳米脂体经葡聚糖硫酸酯修饰后具有很好的消化稳定性、很强EGCG缓释能力及较高的EGCG保护能力。聚合电解质双层修饰的EGCG纳米脂质体具有坚硬的核壳结构,包封率高及缓释能力较好的优点。在模拟小肠环境里,聚合电解质双层修饰的EGCG纳米脂质体表现出更高的EGCG保护能力。