土槿皮乙酸诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究

土槿皮乙酸是从松科植物金钱松的根皮中分离的二萜酸，具有抗真菌、抗肿瘤、抗生育等作用。本文对土槿皮乙酸体外抗肿瘤活性进行了较为系统的研究，主要阐述了土槿皮乙酸在两种肿瘤细胞：人宫颈癌HeLa细胞和人黑色素瘤A375-S2细胞中诱导细胞死亡的机制。 实验结果表明，土槿皮乙酸对HeLa细胞和A375-S2细胞有明显的细胞毒活性，抑制细胞生长呈明显的时间和剂量依赖性。形态学方法、核荧光染色、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）及DNA片段化分析实验证实了土槿皮乙酸诱导HeLa细胞和A375-S2细胞死亡机制为诱导细胞凋亡。 土槿皮乙酸5μM作用于HeLa细胞后，caspase-3的酶原被降解，caspase-3底物ICAD（inhibitor of caspase activated DNase）和PARP(poly-（ADP-ribose）polymerase)降解，caspase-3的抑制剂可部分抑制土槿皮乙酸诱导的细胞死亡，表明土槿皮乙酸诱导HeLa细胞凋亡时激活了caspase-3。促凋亡蛋白Bax表达增加，抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低，但抑凋亡蛋白Bcl-XL表达不变。Bcl-2/Bax的比率降低，从而诱导细胞凋亡。土槿皮乙酸5μM作用24h后即可见p53表达增加，在36h达到峰值。丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）属于一种Ser/Thr蛋白激酶，可在多种不同的信号转导途径中发挥作用。土槿皮乙酸抑制磷酸化ERK（p-ERK）的表达，增加磷酸化JNK（p-JNK）的表达，而对磷酸化p38（p-p38）的表达没有影响。JNK MAPK抑制剂SP600125对土槿皮乙酸诱导的HeLa凋亡有明显的抑制作用。SP600125预处理后可部分抑制土槿皮乙酸诱导的DNA片段化，明显逆转土槿皮乙酸诱导的p53表达增加，并逆转土槿皮乙酸对p-ERK表达的抑制作用。土槿皮乙酸可诱导PKC活力增加，PKC抑制剂星形孢菌素、核因子-κB（NF-κB）抑制剂PDTC、酪氨酸激酶抑制剂genistein和Ras抑制剂manumycin A明显抑制土槿皮乙酸诱导的HeLa细胞死亡。