小胶质细胞及少突胶质细胞功能的调控及罗格列酮对缺血性脑卒中的治疗作用

工作目的：脑卒中是全球第三位、中国首位致死性疾病,有约30%的脑卒中幸存者会罹患瘫痪,是家庭及社会的重大负担。然而,目前临床上除了早期静脉溶栓治疗以外,尚缺乏有效的治疗缺血性卒中的药物方法。寻求新的有效的临床治疗方法,是改善缺血性卒中患者预后的重要手段。小胶质细胞介导的炎症反应是在缺血性脑损伤的的进展中发挥重要作用。因此,调节小胶质细胞介导的炎症反应是减轻缺血性脑损伤、改善卒中患者预后的一个重要靶点,也是近年来研究的热点。其次,白质损伤是缺血性脑损伤的重要组成部分,其在缺血性脑损伤中的重要性愈发受到重视。少突胶质细胞是脑白质的主要构成部分,对缺血性损伤极为敏感,保护少突胶质细胞免受缺血损伤及促进少突胶质细胞再生是维护缺血性卒中后白质完整性的重要手段。因此,在本论文中,我们分别探讨了特境微生物Dalesconols B (TL2)对小胶质细胞介导的炎症反应的调节作用及其机制,以及PPARγ激动剂罗格列酮对缺血性卒中后白质损伤的修复作用及在此过程中其对小胶质细胞和少突胶质细胞功能的影响。研究方法：在论文第一章中,我们采用了LPS刺激的小胶质细胞体外炎症模型研究了TL2对小胶质细胞介导的炎症反应的调节作用及其机制。分别采用实时定量PCR、WB及ELISA检测了促炎介质的表达。使用WB及免疫荧光方法检测了转录因子NF-κB、Akt及MAPK蛋白水平表达情况。使用报告基因检测了小胶质细胞内ARE启动子活性。质粒转染抑制或过表达小胶质细胞内Nrf2活性。在第二章中,我们在小鼠MCAO缺血性卒中模型中,于再灌两小时后给予罗格列酮治疗。采用免疫荧光染色的方法检测了缺血再灌21天后白质损伤情况、少突胶质细胞再生情况及小胶质细胞表型转变。并在缺血后对小鼠神经性为功能进行了评分。结果：1)TL2预处理显著减少了小胶质细胞上清液中NO及PGE2含量,降低了iNOS及COX2蛋白水平表达,减少了多种炎症因子及趋化因子如TNF-α、IL-1β、 IL-6、MCP-1及MIP-1α在基因水平的表达。TL2预处理抑制了磷酸化Akt及NF-κB活性,抑制了p38 MAPK及JNK活性。此外,TL2预处理激活了小胶质细胞内Nrf2/HO-1活性。抑制Nrf2/HO-1活性会阻断TL2对小胶质细胞介导的炎症反应的抑制作用。2)罗格列酮显著改善了缺血性卒中小鼠的神经功能缺陷,减轻了缺血后白质损伤。此外,罗格列酮治疗显著增加了梗死侧侧脑室室下区、齿状回颗粒区及梗死周围OPC数目,并显著增加了梗死周围成熟少突胶质细胞APC数目。罗格列酮治疗还减少了梗死周围Ibal/CD16+的M1小胶质细胞数目,却增加了Iba1/CD206+的M2型小胶质细胞数目。结论：1)TL2显著抑制了LPS诱发的小胶质细胞介导的炎症反应,可能与其抑制小胶质细胞内Akt/NF-Kb、p38及JNK活性从而降低炎症介质基因水平表达有关。也可能与其增强Nrf2/HO-1抗氧化应激作用有关。2)缺血后给予罗格列酮治疗显著改善了缺血性卒中小鼠远期神经功能恢复及白质损伤修复,可能与其增强缺血性损伤后少突胶质细胞再生相关。其促进少突胶质细胞再生的机制可能有两方面,一是直接促进OPC分化成熟为APC,二是间接地通过调节小胶质细胞亚型来影响OPC分化成熟的过程。