固体脂质纳米粒的制备及其小肠吸收

以生理相容的脂质为骨架材料制备得到的固体脂质体纳米粒(solid lipid nanoparticles,SLN)，是继乳剂、脂质体、微粒和毫微粒后，近年来研究十分活跃的靶向控释胶粒给药系统。SLN在室温下通常呈现固态，具有聚合物纳米粒物理稳定性高、药物泄漏少的优势，又兼有脂质体、乳剂毒性低、能大规模生产的优点，是一种潜在的新型给药系统。 本课题选用不同性质的固体脂质，制备得到空间结构稳定、具备不同理化性质的固体脂质纳米粒。采用溶剂扩散法制备甘油单硬脂酸酯纳米粒，以丙酸倍氯米松为模型药物，研究纳米粒的空间结构，测定其粒径分布、表面电位、药物包封率，考察载药纳米粒的体外释放，差示热分析(DSC)法研究药物在SLN中的物理形态。采用溶剂扩散法制备硬脂酸纳米粒，研究纳米粒粒径和表面电位，由冻融试验和冻干后的再分散性试验筛选合适的冻干保护剂。采用化学嫁接的方法，得到了硬脂胺(Octadecylamine,ODA)的异硫氰基荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)荧光标记固体脂质，用DSC和红外光谱法(IR)考察嫁接物的结构；溶剂扩散法制备FITC标记的ODA纳米粒(ODA-SLN)，并考察其理化性质；以A549肺上皮细胞为模型细胞，评价荧光嫁接物纳米粒载体的细胞膜转运功能，四唑盐比色试验(MTT)考察纳米粒的细胞毒性。以环孢素(cyclosporin A,CyA)为模型药物，制备硬脂胺载药纳米粒，测定其粒径、表面电位和药物包封率，进行其体外药物释放动力学研究；以市售环孢素口服液为参比制剂，测定大鼠口服纳米粒的药物动力学参数并比 硕士论文: 固体脂质纳米粒的制备及其小肠吸收 较药物制剂的相对生物利用度;采用灌胃给药后经时收集淋巴液，同时从尾静 脉取血的方法，进行大鼠胸腺淋巴吸收试验，确认固体脂质纳米粒的胃肠道摄 取及淋巴转运机理。 用水性溶剂扩散法可以简便、快速制备得到甘油单硬脂酸醋固体脂质纳米 粒，纳米粒有两个粒径分布区域，数均分布分别为1 16.2(含92.7%)和418.4。 (含7.3%)，平均143.snm;体均分布分别为143.3nm(含20.0%)和4324nm(含 80.0%)，平均381.Inm。采用调节表面电位至接近于零的方法，在低转速离心 (4o00r.min一‘)条件下，即可达到纳米粒与分散体系之间的有效分离，sLN的 回收率明显高于未经调节纳米粒表面电位的高速离心分离方法。Dsc测定结果 显示，在药物被包裹进入SLN骨架后，丙酸倍氯米松特征峰仍然存在，表明药 物以原晶型存在。甘油单硬脂酸酷纳米粒在最初3小时有药物突释现象，随后 4天药物释放明显减慢，每天释放约药物总量的6%。从释放结果可以推测，SLN 是一个药物与脂质的涅合骨架结构，部分药物可能以分子或细小粒子形式吸附 在纳米粒表面，或沉淀在脂质基质的浅表面，从而产生释放曲线初始阶段的药 物突释现象。而在此后的药物释放速率则取决于释放介质对脂质的融蚀程度和 药物从刚性基质结构中的扩散速度。 由溶剂扩散法制备得到硬脂酸纳米粒的粒径为单峰分布，数均粒径为166.8 nm，体均粒径为23 1.2nm。以冻融试验筛选得到的不同浓度泊洛沙姆188为冻 干保护剂，进行样品冻干以后的纳米粒再分散研究，分别采用探头超声、水浴 超声、旋涡分散和手动振摇分散。发现选用不同浓度(2 .5%、5.0%、10.0%、 12.5%、巧.0%)泊洛沙姆188为冻干保护剂的固体纳米粒制剂，均可通过手动 振摇方式使固体纳米粒制剂再分散形成粒径小于soonm的纳米粒混悬液。以 巧.0%泊洛沙姆188为冻干保护剂的冻干制品，采用探头超声可以使固体纳米 粒制剂恢复到冻干前相似的粒径分布。 硬脂胺与异硫氰基荧光素化学嫁接物的皿研究表明，新化合物存在酞胺结 构的特征吸收峰，可确证嫁接物结构存在由梭基和氨基共价结合新形成的酞胺 结构。用溶剂扩散法制备得到的嫁接物纳米粒(ODA-SLN)，纳米粒有两个粒 硕士论文:固体脂质纳米粒的制备及其小肠吸收 径分布区域，数均分布分别为93.Inm(含98.670)和383 3nm(含14cy0)，平均 97，Znm;体均分布分别为1 3 5 .gnm(含54.2%)和397.9nm(含45.8%)，平均 255.9nm，粒子表面电位492mV。倒置荧光显微镜研究表明，FITC标记的 ODA一SLN可以进入A549细胞，并与ODA一SLN的浓度和孵育时间相关。浓度 2.5陀·ml一‘和5.0协gml一‘的oDA一sLN，在24h的孵育期内，未观察到荧光;当 ODA一SLN浓度增加到10陀·ml一’时，孵育lh即可观察到微弱的荧光;随着SLN 浓度的增加和孵育时间的增加，荧光强度逐渐增加。MTT试验结果表明， ODA一SLN的Ies。为和Ie。:分别为一2.55林g·间一‘和55.62林g·蒯一‘。 以环抱素(cyclosporinA，CyA)为模型药物，用溶剂扩散法制备得到的载药 ODA一SLN，载药纳米粒有两个粒径分布区域，数均分布分别为75 .3nm(含98.2cy0) 和3Og.6nm(含1.8%)，平均79.5nm;体均分布分别为76.8nm(含44.3%)和 3 15.snm(含55.7%)，平均Zog.snm粒径，药物包封率97.52%:体外释放研 究显示，纳米粒中的药物以每天药物总量的4.0%速率恒速释放药物16d。环抱 素纳米粒制剂的SD大鼠口服研究表明，其体内药动学过程符合口服一级吸收 的二室模型;市售环抱素口服液参比制剂口服给药后，1.7h达到血药浓度高