目的:探讨中药桑寄生水煎液的遗传毒性和胚胎发育毒性及作用机制,为桑寄生的临床安全用药提供理论依据。方法:1.遗传毒性试验:①急毒试验检测桑寄生对昆明小鼠的最大给药量。②昆明孕鼠30只,随机分为5组,6只/组:桑寄生高、中、低剂量组(40g/kg、20g/kg、10g/kg)和阴性对照组(normal sodium,NS)(0.4ml/20g)白E12天起连续灌胃5天。阳性对照组自E15天起腹腔注射环磷酰胺(cvclophosphamide.CP)(40mg/kg·d),连续2天。E16天处死各组小鼠,骨髓和胚胎肝转移微核试验检测孕鼠骨髓、胎鼠肝脏中嗜多染红细胞微核率。③昆明雄性小鼠30只,分组及用药剂量同上。各组小鼠均连续用药5天,于第一次给药后第35d处死,精子畸形试验检测精子畸形率。2.胚胎发育毒性试验:①急毒试验检测桑寄生对SD大鼠的最大给药量。②SD孕鼠36只,随机分为6组,6只/组。阴性对照组(NS,2ml/200g)和桑寄生高、中、低剂量组(40g/kg、20g/kg、10g/kg)于E6～18天每天灌胃一次,阳性对照2组(a.环磷酰胺,12.5mg/kg,于E13天腹腔注射一次;b.维甲酸,100mg/kg,于E10天灌胃一次)。各组孕鼠均于E18天处死取胚胎,记录吸收胎数、活胎数、死胎数。观察胚胎外观畸形发生情况,并测量胎鼠体重、身长、尾长。③免疫组化方法检测胚胎脑和脊髓组织的Pax3、Cx43蛋白的表达;TUNEL法荧光标记检测胚胎脑和脊髓组织细胞凋亡情况。结果:1.遗传毒性试验:①桑寄生水煎液的昆明小鼠灌胃最大给药量为80g/kg。②桑寄生水煎液10g/kg剂量组的胎鼠肝微核率、孕鼠骨髓微核率和雄鼠精子畸形率与阴性对照组相比,均无显著性差异。20g/kg剂量组诱发的胚胎肝微核率较阴性对照组显著升高(P＜0.05),孕鼠骨髓微核率和雄鼠精子畸形率与阴性对照组相比,无显著性差异。而40g/kg剂量组诱发的胎鼠肝微核率、孕鼠骨髓微核率、精子畸形率均较阴性对照组显著升高(P＜0.05)。2.胚胎发育毒性试验:①桑寄生水煎液的SD大鼠灌胃最大给药量为80g/kg。②桑寄生水煎液10g/kg、20g/kg剂量组孕鼠的胚胎植入数、吸收胎率及死胎率与阴性对照组相比,均无显著性差异。胎鼠体重、身长、尾长与阴性对照组相比,无显著性差异。40g/kg剂量组孕鼠的植入胚胎数较阴性对照组显著减少(P＜0.05),胎鼠体重、身长、尾长较阴性对照组显著性减少(P＜0.05),但吸收胎率与死胎率与阴性对照组无显著性差异。三个剂量组均无外观畸形发生。③桑寄生水煎液三个剂量组胚胎脑和脊髓组织切片Pax3、Cx43蛋白表达平均灰度值与阴性对照组相比,均无显著性差异。桑寄生水煎液10g/kg、20g/kg剂量组胚胎脑和脊髓组织细胞凋亡指数与阴性对照组无显著性差异。40g/kg剂量组凋亡指数较阴性对照组增高(P＜0.05)。结论:1.桑寄生水煎液的昆明小鼠和SD大鼠灌胃的最大给药量均为80g/kg。2.桑寄生水煎液在低剂量时(相当于人临床用量33.3倍)对成年小鼠与胎鼠均无遗传毒性,中剂量(相当于人临床用量66.7倍)仅对胎鼠有潜在的遗传毒性。高剂量(相当于人临床用量133.3倍)对成年小鼠与胎鼠均有潜在的遗传毒性。3.桑寄生水煎液各剂量组均对大鼠胚胎无致畸作用。中、低剂量对大鼠胚胎发育无毒性作用,高剂量有胚胎毒性作用。4。桑寄生水煎液各剂量组均对大鼠胚胎脑和脊髓组织的Pax3、Cx43蛋白表达无影响。高剂量可引起胎鼠脑组织内凋亡的细胞数增加,这可能是引起胎鼠发育迟滞的原因之一。5.提示孕妇在服用桑寄生时,避免用药剂量过高。
