山茱萸总甙抗类风湿性关节炎分子免疫机理研究

类风湿性关节炎是一种常见的以关节损伤为主的慢性、多发性炎症性疾病，其病变 以滑膜组织炎性细胞浸润、滑膜细胞增殖、血管翳形成和软骨及软骨下骨质破坏为主要 免疫病理表现，最终导致受累关节发生畸形而出现关节废用、致残。本实验利用大鼠佐 剂性关节炎模型，分别对山茱萸总甙对大鼠佐剂性关节炎模型防治作用、细胞和分子免 疫抑制机理进行深入研究，并应用体外细胞培养技术和Cell-ELISA方法研究山茱萸总 甙对炎性细胞因子刺激血管内皮细胞表达粘附分子的影响，应用RT-PCR技术研究了山 茱萸总甙对正常大鼠腹腔巨噬细胞iNOS和IL-6mRNA表达的影响，从整体、器官、细胞、 分子四个不同层次探讨了山茱萸总甙的可能作用环节，以期探讨山茱萸总甙治疗类风湿 性关节炎的分子免疫抑制机理，为开发成国家二类中医药新药提供实验依据。 1．山茱萸总甙对大鼠佐剂性关节炎的防治作用 实验采用大鼠佐剂性关节炎模型，观察了山茱萸总甙对于大鼠佐剂性关节炎模型 原发病变、继发病变和体重的影响。结果显示：山茱萸总甙具有明显对抗大鼠佐剂性关 节炎作用，山茱萸总甙的大、中、小三种剂量造模同时给药24天，均能明显抑制大鼠佐 剂性关节炎的关节局部的早期原发肿胀和继发肿胀（P＜0.05或＜0.01），并有明显的量效 关系，在病理改变方面其作用明显，以中、大剂量为好，山茱萸总甙可以明显抑制佐剂性 关节炎大鼠的继发病变侧的炎性细胞浸润、软骨及骨质损伤和血管翳的形成。在大鼠佐 剂性关节炎的病变过程中，与正常组比较，模型组和地塞米松组于注射佐剂后，体重逐渐 下降，山茱萸总甙大、中、小剂量组的体重具有上升趋势，本实验的结果提示：山茱萸 总甙具有明显对抗大鼠佐剂性关节炎作用。 2．山茱萸总甙抗佐剂性关节炎分子免疫机理研究 本实验在上述山茱萸总甙对大鼠佐剂性关节炎具有防治作用的基础上，首先观察了 山茱萸总甙对大鼠佐剂性关节炎模型T淋巴细胞增殖反应、DTH反应和山茱萸总甙对于 正常小鼠T淋巴细胞增殖、T淋巴细胞膜表面CD3、CD4、CD8分子的表达及产生IL-2 的影响，结果显示：山茱萸总甙的大、中、小三种剂量造模同时给药24天，山茱萸总甙 可以明显抑制佐剂性关节炎大鼠的T淋巴细胞增殖反应和DTH反应（P＜0.01）而抑制细胞 免疫，山茱萸总甙的大、中、小三种剂量，连续灌胃7天，山茱萸总甙可以抑制正常小鼠 T淋巴细胞增殖（P＜0.01）。T淋巴细胞膜表面CD3分子的表达（P＜0.01），其中，以大 剂量抑制作用较强，不同剂量的山茱萸总甙均可抑制T淋巴细胞膜表面CD4、CD8分子 的表达（P＜0.05或P＜0.01），中、大剂量还可以提高CD4/CD8的比值，说明山茱萸总甙 抑制CD8的作用比抑制CD4的作用更明显，不同剂量的山茱萸总甙还可以抑制T淋巴细 胞产生IL-2（P＜0.05或P＜0.01），说明山茱萸总甙具有抑制机体细胞免疫功能的作用。 第二观察了山茱萸总甙对AA大鼠炎性细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α以及炎性介质PGE2 产生的抑制作用，结果发现：山茱萸总甙可以明显抑制佐剂性关节炎大鼠的腹腔巨噬细 胞产生IL-1、IL-6和TNF-α（P＜0.05或P＜0.01），反映本药抑制IL-1、IL-6和TNF-α 的炎性顺产生，山莱荚总忒还可以抑制第24天大鼠喇性关节炎血浆中PGE；的产生 o功．叮人从而抑制m巳的致炎、渊作用，说明山荣荚总忒账剂性关节炎的作用与 对抗上述炎性倾作用有关。为了深A8f究山莱荚总戒的免邮用机理，我们应用RT－ PCR 4k7Iv～t究了山莱英总獭于大鼠腻性关节炎模型ILlra和iNOSallA影响，结果 显示：山茉英总忒的大、中、小三种剂量造摸同时鞭24天，山莱荚总忒可以明显抑制 喇性关节炎大民腹腔巨御胞iNOSlllttnA ＄410诱导ILlraedNA ＆ie．说明山莱荚总 忒具有抑制铡性关节炎大邑腹胜巨膨胞ilf0SnlnnA s而抑制炎性介质NO的产生， 憎加诱导ILlralnRNA表达而撇炎幽胞因子ILI炎性介质作用，同时捌俐 用体外 细鹏躺和R… toftsf究了山某奠总忒对正常大鼠腹腔巨噬细胞表达IL6和 iN0haNA影响，结果表明：不同浓度的山莱荚总忒均能抑制IL6和iNOSlllttnA表达， 抑制IL4和iNOSallA表达可能是山莱奠总忒治疗猕湿性关节炎的主要分子免删制 机理之一． 最后的腑实瓣用 Cel ldsISA方法探讨山莱英总忒对 HIJ’VEC表达 ICdel、CD44、 a4①影响，结果发现：r皿 a和 rILl均可诱导的内皮细胞活化而明显增加 IC胁 1、CD44、a4p7等粘附分子的表达，地塞米松和山踉总忒均可抑制r TNWTNWa和rILI 诱导u＊04鞭I CAeCAe二、C04 4、C4＊ 7等粘跳于＜0．01)。抑制脆内皮细脓 ICWel、CD44、a4m等粘附分子而抑制她细胞向关节腔中胭组织内的迁移、积聚 可龈山踉总忒主要抗炎和分子免铡制懈之一． 以上台弘良垢示：山菜奠总忒具有抗炎和免铡制作用而防治佐剂性关节炎，其分子 刎可能与抑制 胞免疫，涨炎性细胞因子和粘附分子的作用有关。