局灶性脑缺血模型大鼠脑皮质蛋白质组差异表达图谱构建及针刺影响

研究意义 脑血管病是导致人类死亡的三大疾病之一,也是中老年人致残的主要原因,其中缺血性脑血管病占75%-80%,且随着世界人口老龄化进程的加快,其威胁及危害将会越来越严重,因此,对本病病理机制和防治措施的研究受到高度重视。 新近出现的蛋白质组学可以比较不同样品之间蛋白质整体表达水平,是揭示疾病分子机制,发现疾病标志蛋白,寻找新的药物靶标的理想工具,也是生命科学进入后基因组时代的标志之一。大脑中动脉是人类卒中的多发部位,大脑皮质是脑缺血易损伤主要部位之一,但迄今为止尚没有发现针对缺血脑皮质组织进行蛋白质组研究的报道。 由于临床研究的局限性,动物实验成为研究脑血管疾病的重要途径。其中采用线栓法阻断大鼠大脑中动脉(MCAO)建立局灶性脑缺血模型是研究缺血性脑血管病的常用方法,在科研中应用广泛。 石学敏院士经过20余年的艰苦探索,提出中风的病机关键为“窍闭神匿,神不导气”,并针对这一根本病机创立了“醒脑开窍”针刺法,临床治疗数十万例,经对9005例脑中风患者进行总结,痊愈占59.27%;总有效率达98.56%。在基础实验研究方面分别证实了“醒脑开窍”针刺法可改善中风患者的血液流变性、提高SOD活性、抑制MDA含量、抑制钙离子细胞内流、调节中枢神经递质代谢、促进缺血区侧枝循环的建立、对异常的颅底血流动力学具有良性调节作用。 本研究采用蛋白质组学技术对MCAO模型大鼠脑皮质进行研究,旨在发现脑缺血早期相关蛋白,并寻找有效的针刺治疗靶蛋白,进一步揭示该针法的脑保护作用及抗损伤修复机制。 研究方法 健康成年雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、“醒脑开窍”针刺组和传统针刺组,各组又分为6h、24h两个时间段。动物模型参照Longa(1989年)线栓法并加以改进,醒法针刺组选内关、人中穴,传统针刺组选曲池、足三里穴,均施以电针各10分钟。各组大鼠在规定时间快速断头取脑,提取脑皮质蛋白质,双向电泳展示后,以ImageMaster 2D Elite v3.01软件对2-DE图谱进行分析,寻找差