同种异体富血小板血浆标准化制备的研究

富血小板血浆（PRP）富含多种生长因子，目前国内外大量文献报道这些生长因子可显著促进骨缺损的修复，并在体外对骨髓基质干细胞的增殖与分化有明显的促进作用。然而也有一些学者认为在动物实验中，富血小板血浆无促进骨再生的作用，或在临床应用中PRP复合植骨材料修复骨缺损的效果不明显，其主要原因是各研究人员及临床工作者所使用的富血小板血浆其制备标准不一致。并且目前研究人员及临床工作者大都使用患者自体血液，这无疑会对患者的机体形成二次打击，且由于各患者存在个体差异，导致所制备的PRP质量不一致，从而影响研究结果与临床疗效。本课题主要对同种异体PRP与自体PRP进行比较，研究同种异体能否代替自体富血小板血浆，为后续同种异体富血小板血浆的标准化制备提供一些理论依据，使得制备方法统一、疗效确定的同种异体PRP制剂能像其他药品一样，被广泛应用于科研和临床，具有极为广阔的应用前景。 【目的】比较自体与同种异体富血小板血浆在体外对兔骨髓基质干细胞增殖和分化效应的差异，并探索一个最适的作用浓度。比较自体与同种异体富血小板凝胶在体内对兔桡骨缺损修复的差异，探讨同种异体PRP能否取代自体PRP，为后续同种异体PRP标准化的制备提供理论依据。 【方法】常规培养兔BMSCs，分为4组：自体PRP组、异体PRP组、阳性对照组及阴性对照组。分别在干预的第4、8、12、16、20、24、28天检测各组MTT、碱性磷酸酶活性、细胞凋亡率并进行碱性磷酸酶及钙结节染色，比较各组对BMSCs增殖、分化与凋亡作用的差异。 将健康新西兰兔随机分为自体组、异体组和对照组3组，建立双前肢桡骨缺损模型，其中自体组（A组）移植“支架材料+自体BMSCs+自体PRP凝胶”，异体组（B组）移植“支架材料+自体BMSCs+异体PRP凝胶”,对照组（C组）移植“支架材料+自体BMSCs”。在术后第1、2、3月分别观察各组大体标本、X线平片、Micro-CT、生物力学检测以及进行组织形态学HE染色，比较各组间材料降解及新骨形成等指标有无差异。 【结果】干预至20天时，异体各浓度组、阳性组、阴性组MTT检测其OD值各组间两两比较差异均有统计学（P<0.05），且最适作用浓度为30%；30%浓度自体组和异体组、阳性组、阴性组的碱性磷酸酶活性平均分别为0.418±0.017、0.421±0.014、0.532±0.022、0.578±0.015，其中自体组、异体组分别与阳性组及阴性组比较差异均有统计学意义（P<0.05）；同一时间相同浓度的自体组与异体组对细胞增殖、分化效应比较差异大多无统计学意义（P>0.05）。 大体标本及X平片显示A组与B组骨小梁形成、连续皮质骨出现及髓腔再通时间均早于C组，Micro-CT重建显示A组与B组材料降解速率、新生骨形成速率及完全塑形时间均快于C组，骨组织计量分析结果显示A组与B组组织骨密度、骨体积分数及骨小梁数目均明显优于C组，但骨小梁厚度比较3组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）；最大压缩载荷各组间两两比较差异无统计学意义（P>0.05）；组织形态学HE染色显示A组与B组新生血管形成时间均早于C组，且镜下软骨细胞、成骨细胞及破骨细胞较C组出现较早且量较多。 【结论】在兔子BMSCs体外培养及体内骨缺损修复实验中，同种异体PRP均可取代自体PRP。