电针对大鼠颈椎病模型软骨细胞凋亡及PI3K/Akt的影响

目的：探讨电针“颈夹脊”穴和“手三里”穴对颈椎病模型软骨细胞凋亡及P13K/Akt信号通路上的PI3K和Akt两个重要调控因子的影响,为阐明电针介导该信号通路在延缓软骨细胞退变过程中的机理提供理论依据。 方法：40只SD大鼠(雌雄各半)用随机数字表法先抽取10只作为假手术组,只做皮肤切开缝合处理,其余30只则为造模组,进行动静力失衡性颈椎病模型的制造;造模3个月后用电镜检测确认造模成功后,再将造模组随机分为模型对照组(简称模型组)、模型电针治疗组(简称电针组)、模型莫比可片治疗组(简称莫比可组),每组8只大鼠,所有分组均为雌雄各半。电针组进行颈夹脊(双侧)、手三里穴(双侧)的针刺治疗(导师经验选穴处方),每次取同侧穴位,左右两侧穴位交替进行,电针连接颈夹脊和手三里穴,每次治疗时间25min,1次/d,连续治疗14d为1疗程,两个疗程之间间隔2天,共治疗2个疗程；莫比可组予以莫比可灌胃治疗,剂量按体表面积折算成人的等量剂量约为0.7878mg/kg/d,1次/d,治疗疗程与电针组相同；模型组和假手术组只作固定而不做其它任何处理,治疗疗程与电针组相同。疗程结束,取大鼠颈椎间盘C2-7用于免疫组化和蛋白质印迹法的检测,观察颈椎间盘软骨细胞凋亡、P13K.P-Akt及Akt的蛋白表达情况。 结果：(1)电镜结果显示,模型组与假手术组比较,软骨细胞可见细胞表面的微绒毛样凸起减少,细胞核内可见染色质固缩的明显凋亡性改变,细胞外基质中的胶原原纤维减少,且排列变化。 (2)免疫组化：模型组较假手术组Bcl-2的阳性细胞量下降,有统计学意义(P<0.05)莫比可组和电针组均较模型组Bcl-2的阳性表达量上升,具有统计学意义(P<0.05)。模型组较假手术组Bax的阳性细胞量升高,有统计学意义(P<0.05)；莫比可组和电针组均较模型组Bax的阳性表达量下降,具有统计学意义(P<0.05)。 (3) Western Blot模型组较假手术组P13K、P-Akt的蛋白表达量下降,有统计学意义(P<0.05)；莫比可组和电针组均较模型组P13K、P-Akt的蛋白表达量上升,具有统计学意义(P<0.05)。假手术组、模型组、电针组、莫比可组的Akt的蛋白表达量无明显差异(P>0.05),不具有统计学意义。 结论：(1)电针颈夹脊穴和手三里穴可抑制颈椎间盘软骨细胞凋亡 (2)电针能够提高颈椎病软骨细胞内Bcl-2蛋白的阳性表达,降低Bax的表达,提示电针能够调控细胞内Bcl-2和Bax的比例,抑制凋亡 (3)电针能够提高颈椎病软骨细胞内PI3K、P-Akt的蛋白表达量,提示电针抑制软骨细胞凋亡、延缓颈椎间盘退变的作用机制可能与激活PI3K/Akt信号转导通路有关。 (4)综上所述,本实验结果提示电针可能是通过激活PI3K/Akt信号转导通路,达到抑制软骨细胞凋亡的作用,从而改善椎间盘的退变。