知母多糖的提取分离及其活性探讨

本论文对知母多糖的提取分离、抗氧化性、进行了较为系统的研究,同时研究了知母多糖和知母蛋白抑制蛋白酪氨酸磷酸酶-1B（PTP-1B）活性和降血糖性能进行一系列研究,主要结论如下: 运用传统热水提取法和超声波辅助提取法对知母多糖的提取效果进行对比,分别在单因素实验的基础上,进行响应面优化实验。结果表明:传统热水提取法对知母多糖提取率的影响因素由大到小的顺序为:提取时间>提取次数>液料比,确定最佳提取条件为:提取3次,液料比为10mL/g,提取时间4h,在此条件下测得知母多糖得率为25.72%;超声波辅助提取法对知母多糖得率的影响因素由大到小的顺序为:提取功率>超声时间>提取次数>液料比,其最佳提取条件为:提取3次,液料比10mL/g,提取时间2h,超声功率84W,在此条件下实际测得知母多糖提取率为30.12%。超声辅助提取法与传统热水提取法相比,具有提取时间短、液料比小、提取率高等优点。 通过实验研究了Sevage法和TCA法除蛋白的效果,结果表明Sevage法不仅能够降低多糖损失,使其保留率达到57.24%,而且蛋白质的脱除也比较彻底,脱除率为88.81%。采用膜分离技术对知母多糖进一步纯化,发现知母多糖组分分子量主要集中在30KDa～100KDa。运用葡聚糖凝胶G-100柱层析,上样条件:知母多糖浓度0.3mg/mL,上样量3mL;洗脱条件:洗脱液为0.1mol/LNaCl溶液,洗脱速度0.9mL/min时,多糖溶液通过葡聚糖凝胶柱G-100柱层析后分离出2个组分,保留时间分别在24～102min和144～186min。 通过测定O2-·和·OH清除率,考察知母多糖抗氧化性能,结果表明知母多糖对O2-·的清除效果一般,而对·OH具有较理想的清除效果。知母多糖浓度为0.07mg/mL时,·OH清除率可以达到50%,而当知母多糖浓度为0.7mg/mL时,O2-·清除率只有29.07%。进一步考察不同组分知母多糖抑制PTP-1B的活性,膜分离后,分子量在30KDa～100KDa多糖组分具有较高的抑制PTP-1B的活性。经葡糖糖凝胶G-100柱层析后知母多糖组分1和知母多糖组分2的抑制率分别为73.81%和32.47%。知母多糖的抑制率随脱除蛋白质含量降低后下降。当蛋白含量为1.87μg/mL时,知母多糖的抑制率达到为45.16%。 通过糖尿病SD大鼠实验得出知母多糖有良好的降血糖作用,并能改善大鼠消瘦症状。同时,知母多糖具有一定程度的调节血脂的作用。最后,对SD大鼠进行胰腺病理组织学观察进一步说明了,知母多糖能改善糖尿病SD大鼠的胰岛素抵抗并且对胰腺具有一定的修复作用。 本论文通过研究知母多糖两种提取方法,并对其进行除杂和纯化研究,研究了与糖尿病并发症相关的抗氧化性及与胰岛素细胞相关的抑制PTP-1B的活性,进一步通过糖尿病大鼠模型实验证明知母多糖不同组分和知母蛋白的降血糖效果。这将为如何更深入的利用知母多糖以及了解知母多糖在糖尿病治疗过程中的作用和机理提供参考数据。