β-谷甾醇对人肺癌细胞增殖、凋亡影响的初步研究

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作者
周玲玉
机构
[1] 重庆医科大学
关键词
β-谷甾醇; 肺癌; A549; 细胞周期; 细胞凋亡;
D O I
暂无
年度学位
2016
学位类型
硕士
导师
摘要
目的:肺癌是世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。其中非小细胞型肺癌占肺癌总数的75%-80%,绝大部分患者确诊时已为中晚期。国内外多项研究发现,植物化学物对多种肿瘤具有化学预防作用,本研究以β-谷甾醇为实验对象,研究它在体外条件下对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度β-谷甾醇(0、5、10、20、40μM)处理人肺癌A549、NCI-H460细胞24h后,采用细胞活性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测β-谷甾醇对细胞活性的影响;Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术(Flow cytometer,FCM)检测不同浓度β-谷甾醇(0、2.5、10、40μM)作用下A549细胞周期分布的影响,Real-Time PCR检测周期相关基因Cyclin B1、Cdk1、Cdc25C的变化;以上同样实验条件下,FCM分析β-谷甾醇对A549细胞凋亡率的变化,Western Blotting检测凋亡相关蛋白p53、Bax和Bcl-2的变化。结果:β-谷甾醇以剂量依赖性方式明显抑制A549细胞的生长,与对照组相比存在显著统计学差异(P<0.01),对NCI-H460亦有细胞活性抑制作用(P<0.05);流式结果分析表明β-谷甾醇作用A549细胞24h后,细胞周期各期均出现不同程度的变化,但与对照组相比G2/M期的差异有统计学意义(P<0.05),而G0/G1和S期未见明显变化,同时Cdc25C、Cyclin B1、CDK1 mRNA表达下调;β-谷甾醇处理A549细胞24h后,各实验组均导致不同程度的细胞凋亡,实验组与对照组相比总凋亡率差异显著(P<0.01),同时上调p53、Bax表达和下调Bcl-2蛋白表达。结论:β-谷甾醇能以剂量依赖性方式明显抑制肺癌A549、NCI-H460细胞的生长,同时可将A549细胞周期进展停滞于G2/M期,并引起细胞凋亡性死亡。
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页数:52
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